本文關(guān)鍵詞：人microRNA-339慢病毒載體的構(gòu)建及其對結(jié)腸癌細(xì)胞SW620遷移的影響

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【摘要】：目的構(gòu)建人microRNA-339(has-miR-339)慢病毒載體,并探討miR-339-5p/3p對結(jié)腸癌細(xì)胞SW620遷移能力的影響。方法由miRBase及NCBI數(shù)據(jù)庫查找獲得miR-339前體序列(pre-miR-339)及其側(cè)翼序列,將pre-miR-339和PLVTHM載體經(jīng)雙酶切后連接,產(chǎn)生PLVTHM-pre-miR-339慢病毒載體,并經(jīng)測序鑒定;以PLVTHM-pre-miR-339、psPAX2和pMD2.G三質(zhì)粒包裝系統(tǒng)共同轉(zhuǎn)染293FT細(xì)胞,包裝產(chǎn)生慢病毒。流式細(xì)胞儀篩選建立穩(wěn)定過表達(dá)premiR-339的SW620細(xì)胞株,實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR檢測miR-339-5p及miR-339-3p表達(dá)。利用細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)進(jìn)行細(xì)胞遷移能力檢測。結(jié)果成功構(gòu)建PLVTHM-pre-miR-339慢病毒載體,測序證實(shí)所插入基因序列完全正確。倒置熒光顯微鏡下觀察可見轉(zhuǎn)染后的293FT細(xì)胞及SW620細(xì)胞均表達(dá)綠色熒光。在過表達(dá)pre-miR-339的SW620亞細(xì)胞系中,miR-339-5p及miR-339-3p表達(dá)水平顯著高于空載對照組。劃痕實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:與SW620/PLVTHM-NC組相比,SW620/PLVTHM-pre-miR-339組細(xì)胞遷移減緩,劃痕較寬。結(jié)論成功構(gòu)建了PLVTHM-pre-miR-339慢病毒載體和穩(wěn)定過表達(dá)miR-339-5p及miR-339-3p的SW620亞細(xì)胞系,并證實(shí)miR-339-5p/3p可抑制結(jié)腸癌細(xì)胞SW620的遷移能力。
【作者單位】： 廣東藥學(xué)院人體解剖學(xué)教研室;南方醫(yī)科大學(xué)病理學(xué)系 廣東省分子腫瘤病理學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;
【關(guān)鍵詞】： miR- 結(jié)腸癌 慢病毒載體 細(xì)胞遷移
【基金】：國家自然科學(xué)基金(編號:81272758)
【分類號】：R346
【正文快照】： 2014-04-14接收2南方醫(yī)科大學(xué)病理學(xué)系,廣東省分子腫瘤病理學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,廣州510515微小RNA(microRNA,miRNA)是一類具有轉(zhuǎn)錄后水平基因表達(dá)調(diào)控作用的非編碼小分子RNA,給結(jié)腸癌的研究帶來了重大啟示[1-2]。miRNA可在結(jié)腸癌發(fā)生、發(fā)展過程中充當(dāng)癌基因或抑癌基因的作用[3]。miR

【參考文獻(xiàn)】

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1 王彥梅;何家才;鄒多宏;朱思Y，

本文編號：1060638