本文關鍵詞：人microRNA-339慢病毒載體的構建及其對結腸癌細胞SW620遷移的影響

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【摘要】：目的構建人microRNA-339(has-miR-339)慢病毒載體,并探討miR-339-5p/3p對結腸癌細胞SW620遷移能力的影響。方法由miRBase及NCBI數(shù)據(jù)庫查找獲得miR-339前體序列(pre-miR-339)及其側翼序列,將pre-miR-339和PLVTHM載體經(jīng)雙酶切后連接,產(chǎn)生PLVTHM-pre-miR-339慢病毒載體,并經(jīng)測序鑒定;以PLVTHM-pre-miR-339、psPAX2和pMD2.G三質粒包裝系統(tǒng)共同轉染293FT細胞,包裝產(chǎn)生慢病毒。流式細胞儀篩選建立穩(wěn)定過表達premiR-339的SW620細胞株,實時熒光定量RT-PCR檢測miR-339-5p及miR-339-3p表達。利用細胞劃痕實驗進行細胞遷移能力檢測。結果成功構建PLVTHM-pre-miR-339慢病毒載體,測序證實所插入基因序列完全正確。倒置熒光顯微鏡下觀察可見轉染后的293FT細胞及SW620細胞均表達綠色熒光。在過表達pre-miR-339的SW620亞細胞系中,miR-339-5p及miR-339-3p表達水平顯著高于空載對照組。劃痕實驗結果顯示:與SW620/PLVTHM-NC組相比,SW620/PLVTHM-pre-miR-339組細胞遷移減緩,劃痕較寬。結論成功構建了PLVTHM-pre-miR-339慢病毒載體和穩(wěn)定過表達miR-339-5p及miR-339-3p的SW620亞細胞系,并證實miR-339-5p/3p可抑制結腸癌細胞SW620的遷移能力。
【作者單位】： 廣東藥學院人體解剖學教研室;南方醫(yī)科大學病理學系 廣東省分子腫瘤病理學重點實驗室;
【關鍵詞】： miR- 結腸癌 慢病毒載體 細胞遷移
【基金】：國家自然科學基金(編號:81272758)
【分類號】：R346
【正文快照】： 2014-04-14接收2南方醫(yī)科大學病理學系,廣東省分子腫瘤病理學重點實驗室,廣州510515微小RNA(microRNA,miRNA)是一類具有轉錄后水平基因表達調控作用的非編碼小分子RNA,給結腸癌的研究帶來了重大啟示[1-2]。miRNA可在結腸癌發(fā)生、發(fā)展過程中充當癌基因或抑癌基因的作用[3]。miR

【參考文獻】

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1 王彥梅;何家才;鄒多宏;朱思Y，

本文編號：1060638