本文關(guān)鍵詞：結(jié)核分枝桿菌標(biāo)準(zhǔn)株mazEF6缺失株的構(gòu)建

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【摘要】：為構(gòu)建結(jié)核分枝桿菌標(biāo)準(zhǔn)株H37Rv毒素-抗毒素系統(tǒng)maz EF6基因缺失突變株。采用聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)技術(shù),分別從H37Rv和PUC-19K質(zhì)粒上擴(kuò)增出maz EF6基因的同源臂及卡那霉素抗性基因kan基因;應(yīng)用融合PCR技術(shù)將maz EF6基因的同源臂和kan基因進(jìn)行雜交拼接,獲得目的融合片段,并將該融合片段克隆于p MD-19T(simple)載體形成自殺質(zhì)粒p MD-19T-Δmaz EF6-kan,將構(gòu)建的自殺質(zhì)粒轉(zhuǎn)化至大腸桿菌DH5a中;利用電穿孔技術(shù)將自殺質(zhì)粒電轉(zhuǎn)至H37Rv標(biāo)準(zhǔn)株中;并將該菌株涂于卡那霉素抗性改良羅氏培養(yǎng)基,培養(yǎng)3-4周后,刮取能在卡那霉素抗性培養(yǎng)基中生長(zhǎng)的結(jié)核分枝桿菌單個(gè)菌落,以提取的陽(yáng)性菌株全基因組DNA為模板,PCR擴(kuò)增克隆片段,并測(cè)序。對(duì)所獲得H37RvΔmaz EF6缺失突變株進(jìn)行遺傳穩(wěn)定性檢測(cè)。結(jié)果顯示,該缺失株在15代內(nèi)未發(fā)生回復(fù)性突變,成功獲得H37RvΔmaz EF6缺失突變株。由此可知,本研究為今后研究毒素-抗毒素系統(tǒng)maz EF6基因的生物學(xué)功能奠定基礎(chǔ)。
【作者單位】： 石河子大學(xué)醫(yī)學(xué)院病原生物學(xué)與免疫學(xué)教研室;石河子大學(xué)醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科;
【關(guān)鍵詞】： 結(jié)核分枝桿菌 毒素-抗毒素系統(tǒng) 缺失突變株
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(81160368,81341079)
【分類號(hào)】：R378.911
【正文快照】： 結(jié)核病(tuberculosis,TB)是一種由結(jié)核分枝桿菌(Mycobacteria tuberculosis,MTB)感染引起的最常見(jiàn)的人獸共患慢性傳染病。隨著MTB的耐藥率增加、HIV合并MTB感染的增多,結(jié)核病在全球的流行日趨增強(qiáng)。結(jié)核分枝桿菌的毒素-抗毒素系統(tǒng)(toxin-antit-oxinsystem,TAS)也被稱為成癮或

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