發(fā)布時間：2017-10-12 08:32

  本文關(guān)鍵詞：基于顏色判定的環(huán)介導(dǎo)等溫擴增方法檢測EV71

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【摘要】：建立了一種基于顏色判定的靈敏、快速和經(jīng)濟的逆轉(zhuǎn)錄環(huán)介導(dǎo)等溫擴增(reverse transcription loop-mediated isothermal amplification,RT-LAMP)方法應(yīng)用于腸道病毒71(enterovirus 71,EV71)基因檢測。針對EV71病毒VP1基因特異性序列的設(shè)計出6條特異引物,在等溫條件下(63℃)進行擴增反應(yīng)60min。在擴增前加入染料羥基萘酚藍(HNB)作為反應(yīng)指示劑,以其顏色變化作為結(jié)果判斷標準。進行特異性/靈敏度分析,同時與RT-PCR方法進行比較,并對93份疑似患者中咽拭子的病毒核酸進行了檢測。通過顏色變化能觀察到LAMP擴增產(chǎn)物的存在,且與柯薩奇病毒A16型(CA16)、輪狀病毒、諾如病毒無交叉反應(yīng)發(fā)生。所建立的RT-LAMP檢測方法靈敏,靈敏度為500copy/tube,與定量PCR靈敏度相同。93份咽拭子標本中,RT-LAMP檢測為46份陽性,熒光定量PCR檢測有為44份陽性,二者統(tǒng)計學(xué)無顯著差異。RTLAMP是一種快速、敏感、特異、經(jīng)濟的方法,適合用于基層醫(yī)療機構(gòu)臨床檢測。
【作者單位】： 河南大學(xué)淮河醫(yī)院兒科;河南大學(xué)醫(yī)學(xué)院免疫學(xué)研究所;
【關(guān)鍵詞】： 逆轉(zhuǎn)錄-環(huán)介導(dǎo)等溫擴增技術(shù) 腸道病毒型 手足口病
【分類號】：R392-33
【正文快照】： 2011年全國手足口病的患病人數(shù)是1 619 706人,死亡509人。目前,該病已經(jīng)成為全國高發(fā)傳染病之一,發(fā)病范圍廣、影響大,發(fā)病率呈明顯上升趨勢[1]EV71與手足口病(hand,foot and mousedisease,HFMD)的暴發(fā)流行關(guān)系密切,并可導(dǎo)致無菌性腦脊髓膜炎、腦炎、心肌炎和腦麻痹后遺癥等嚴

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本文編號：1017715