本文關(guān)鍵詞：戊型肝炎病毒ORF3和標(biāo)簽His融合真核表達(dá)載體的構(gòu)建與表達(dá)

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【摘要】：目的體外構(gòu)建HEV ORF3蛋白融合His標(biāo)簽的真核表達(dá)載體及其初步鑒定和蛋白表達(dá)。方法從1例男性31歲戊型肝炎患者血清中分離HEV RNA,逆轉(zhuǎn)錄合成c DNA,特異性引物擴(kuò)增HEV ORF3片段,將其定向連接到pc DNA3.1(-)-His真核表達(dá)載體中,經(jīng)抗生素篩選后,酶切及測序鑒定其序列正確性。采用提取質(zhì)粒轉(zhuǎn)染Hep G2細(xì)胞,培養(yǎng)96 h后裂解細(xì)胞,采用抗His-Tag抗體進(jìn)行Western blot檢測目的蛋白。結(jié)果從戊型肝炎患者血清中成功分離出I型HEV RNA,經(jīng)抗生素篩選、酶切鑒定和測序確認(rèn)pc DNA3.1(-)-HEF3-His真核表達(dá)載體構(gòu)建成功,轉(zhuǎn)染Hep G2細(xì)胞,經(jīng)Western blot檢測顯示15 k Da位置有明顯融合蛋白條帶。結(jié)論成功構(gòu)建了HEV ORF3與His標(biāo)簽融合的真核表達(dá)載體,體外轉(zhuǎn)染Hep G2細(xì)胞后鑒定其工作良好,為后續(xù)HEV ORF3蛋白的研究奠定了基礎(chǔ)。
【作者單位】： 遼寧省盤錦市傳染病醫(yī)院;盤錦市中醫(yī)院;解放軍第302醫(yī)院肝衰竭診療與研究中心;
【關(guān)鍵詞】： 戊型肝炎病毒 真核表達(dá) 融合蛋白
【分類號】：R373.21
【正文快照】： 戊型肝炎是由戊型肝炎病毒(Hepatitis Evirus,HEV)引起的病毒性肝炎。該病毒主要經(jīng)由腸道傳播,常引起爆發(fā)流行,主要發(fā)生在青壯年,男性高于女性[1],其發(fā)病重,病死率高。也有報(bào)道稱,年齡越大其感染率越高[2]。戊型肝炎所致人群病死率在0.5%~1.5%之間,在孕婦和老年人中高達(dá)20%以

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