本文關(guān)鍵詞：小鼠脫氧核糖核酸酶Ⅱα融合基因的原核表達(dá)及多克隆抗體的制備

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【摘要】：目的原核表達(dá)LHRH-TAT-DNaseⅡα融合基因(LTD),并制備多克隆抗體。方法采用PCR法克隆LTD基因片段,插入p ET-28a載體,構(gòu)建重組原核表達(dá)質(zhì)粒p ET-28a-LTD,轉(zhuǎn)化大腸埃希菌BL21(Rossetta),經(jīng)IPTG誘導(dǎo)表達(dá)。融合蛋白經(jīng)電洗脫分離純化后,免疫獺兔,制備LTD蛋白多克隆抗體,采用ELISA法檢測抗血清效價(jià)。結(jié)果構(gòu)建的重組原核表達(dá)質(zhì)粒經(jīng)PCR、雙酶切及測序鑒定證明構(gòu)建正確;純化得到的融合蛋白相對(duì)分子質(zhì)量為39 270,濃度為0.5 mg/ml,可被兔抗LTD抗體識(shí)別。血清抗體效價(jià)可達(dá)1∶6 400。結(jié)論成功原核表達(dá)了DNaseⅡ融合蛋白LTD,并制備了多克隆抗體,為進(jìn)一步研究DNaseⅡ蛋白體內(nèi)外抗腫瘤活性及作用機(jī)制奠定了基礎(chǔ)。
【作者單位】： 長春中醫(yī)藥大學(xué);吉林大學(xué)人獸共患病研究所人獸共患病研究教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院軍事獸醫(yī)研究所;中國疾病預(yù)防控制中心寄生蟲病預(yù)防控制所;
【關(guān)鍵詞】： 脫氧核糖核酸酶Ⅱ 融合基因 原核細(xì)胞 基因表達(dá) 多克隆抗體
【分類號(hào)】：R392;Q78
【正文快照】： 脫氧核糖核酸酶Ⅱ(deoxyribonucleaseⅡ,DNaseⅡ,EC 3.1.22.1)是哺乳動(dòng)物及多種后生動(dòng)物細(xì)胞內(nèi)一種酸性核酸內(nèi)切酶,可參與降解發(fā)育過程中積累的未消化凋亡細(xì)胞DNA,不需要依賴二價(jià)陽離子Ca2+和Mg2+,其發(fā)揮活性的最適p H為4.5~5.5的酸性條件。DNaseⅡ通過破壞核苷酸之間的磷酸二

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1 孫軍;;淺談原核表達(dá)的技巧[J];大學(xué)時(shí)代;2006年07期

2 金元昌;李景鵬;李會(huì)東;周建紅;;重組促性腺激素釋放激素基因原核表達(dá)的影響因素[J];湘潭師范學(xué)院學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);2006年02期

3 韓鈺;王艷林;;小鼠精胺氧化酶的原核表達(dá)與鑒定[J];生物技術(shù)通訊;2007年01期

4 朱向前;楊靜;丁曉然;王升啟;;重組人磷脂爬行酶1的原核表達(dá)及純化[J];生物技術(shù)通訊;2011年06期

5 哲名家;張淼濤;云濤;王玢tx;劉光清;;兔巖藻糖基轉(zhuǎn)移酶基因的克隆與原核表達(dá)[J];西北農(nóng)林科技大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);2012年04期

6 謝海燕,郭霄峰;豬α-干擾素的原核表達(dá)[J];華南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào);2004年04期

7 孫東波;馮力;劉杰;時(shí)洪艷;佟有恩;劉勝旺;童光志;;豬傳染性胃腸炎病毒n基因的原核表達(dá)及重組蛋白的免疫活性分析[J];病毒學(xué)報(bào);2006年02期

8 孫軍;王俊杰;秦波;伏秀青;高倩倩;王興智;朱筱娟;;粘著斑激酶的原核表達(dá)、純化及抗體的制備[J];分子科學(xué)學(xué)報(bào);2007年02期

9 戴華;鄭佳玉;陳俊華;潘志明;焦新安;;雞α干擾素基因的原核表達(dá)及其活性測定[J];中國預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào);2009年10期

10 湯承;張兆敏;岳華;;雞熱休克蛋白70基因的克隆及原核表達(dá)[J];西南民族大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);2011年03期

中國重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 馬文濤;閆若潛;吳志明;劉光輝;盛敏;謝彩華;;豬白細(xì)胞介素-6的原核表達(dá)及其生物學(xué)活性研究[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)2010年學(xué)術(shù)年會(huì)——第二屆中國獸醫(yī)臨床大會(huì)論文集(下冊(cè))[C];2010年

2 丁夢(mèng)蝶;魯?shù)?王紅寧;田浪;陽泰;張毅;樊汶樵;郭自成;;禽傳染性支氣管炎病毒多基因串聯(lián)表位抗原的原核表達(dá)研究[A];四川省動(dòng)物學(xué)會(huì)第九次會(huì)員代表大會(huì)暨第十屆學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2011年

3 林海波;張桂紅;詹國英;廖明;任濤;羅開健;曹偉勝;徐成剛;辛朝安;;豬白細(xì)胞介素-6基因的非融合原核表達(dá)研究[A];第一屆中國養(yǎng)豬生產(chǎn)和疾病控制技術(shù)大會(huì)——2005中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)學(xué)術(shù)年會(huì)論文集[C];2005年

4 隋桂琴;左玲;王桂云;;人堿性成纖維細(xì)胞生長因子的原核表達(dá)[A];中國眼底病論壇·全國眼底病專題學(xué)術(shù)研討會(huì)論文匯編[C];2008年

5 黃斯勇;梁英民;韓驊;李國輝;伍艷蘭;康志杰;何飛;張萍;徐恒;劉利;;人Detla-like4ext-93-217原核表達(dá)、純化及蛋白活性檢測[A];第12屆全國實(shí)驗(yàn)血液學(xué)會(huì)議論文摘要[C];2009年

6 張紅;劉志國;屈伸;;人源受體相關(guān)蛋白的原核表達(dá)優(yōu)化及功能檢測[A];湖北省暨武漢生物化學(xué)與分子生物學(xué)學(xué)會(huì)第八屆會(huì)員代表大會(huì)和第十五次學(xué)術(shù)年會(huì)論文摘要匯編[C];2004年

7 袁志棟;王志亮;劉雨田;吳曉東;劉海生;;水貂朊蛋白前體基因的克隆與原核表達(dá)[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)畜牧獸醫(yī)生物技術(shù)學(xué)分會(huì)暨中國免疫學(xué)會(huì)獸醫(yī)免疫分會(huì)第六次研討會(huì)論文集[C];2005年

8 王士友;張耀洲;;一個(gè)新的家蠶基因的克隆、原核表達(dá)及純化[A];華東六省一市生物化學(xué)與分子生物學(xué)學(xué)會(huì)2006年學(xué)術(shù)交流會(huì)論文集[C];2006年

9 伍艷蘭;黃斯勇;牛曉麗;張麗;陳茹菲;何飛;張萍;梁英民;劉利;;人Delta-like4ext-93-217原核表達(dá)、純化及蛋白活性檢測[A];第12屆全國實(shí)驗(yàn)血液學(xué)會(huì)議論文摘要[C];2009年

10 馬文濤;閆若潛;吳志明;劉光輝;盛敏;謝彩華;;豬白細(xì)胞介素-6的原核表達(dá)及其生物學(xué)活性研究[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)動(dòng)物傳染病學(xué)分會(huì)第四次豬病防控學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2010年

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前8條

1 張曉鳴;人IL-16的原核表達(dá)與其功能的初步研究[D];中國科學(xué)院研究生院（上海生命科學(xué)研究院）;2000年

2 曹秀利;楊樹PtCDD基因的原核表達(dá)及酶活分析[D];南京林業(yè)大學(xué);2008年

3 黃新河;小鼠TAp63γ的原核表達(dá)、純化、結(jié)構(gòu)及功能初步研究[D];四川大學(xué);2007年

4 張大鵬;VP60蛋白的原核表達(dá)、抗體制備及VP60基因轉(zhuǎn)化的研究[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2012年

5 張少斌;豌豆肌動(dòng)蛋白異型體（PEAc1）的原核表達(dá)及其藻熒光探針的研制[D];中國農(nóng)業(yè)大學(xué);2004年

6 尹國華;利用Red重組系統(tǒng)構(gòu)建dsRNA原核表達(dá)體系抗煙草花葉病毒的研究[D];山東農(nóng)業(yè)大學(xué);2009年

7 韓凌霞;豬圓環(huán)病毒2型基因的原核表達(dá)與單克隆抗體的制備及感染性分子克隆的動(dòng)物接種試驗(yàn)[D];中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2003年

8 于揚(yáng);重組人源GPx4及其模擬物的原核表達(dá)、結(jié)構(gòu)與功能的研究[D];吉林大學(xué);2013年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 周鵬;結(jié)核分枝桿菌特異性蛋白的原核表達(dá)、純化及免疫原性分析[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2015年

2 高小磊;六種結(jié)核分枝桿菌特異性抗原的原核表達(dá)及16 KD-38 KD和Ag85A血清學(xué)診斷效果的研究[D];蘭州大學(xué);2015年

3 彭傳林;家蠅抗真菌肽MAF-1原核表達(dá)體系優(yōu)化與活性分析[D];貴陽醫(yī)學(xué)院;2015年

4 鐘樹懷;豬囊尾蚴膜聯(lián)蛋白的原核表達(dá)及其免疫反應(yīng)性分析[D];貴陽醫(yī)學(xué)院;2015年

5 孫明潭;豬繁殖與呼吸綜合征病毒河北地方株ORF7基因的原核表達(dá)及ELISA方法的建立[D];河北農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

6 張良斌;天祝白牦牛KAP家族基因克隆、原核表達(dá)及其在皮膚中的表達(dá)分析[D];西北民族大學(xué);2015年

7 達(dá)小強(qiáng);牦牛轉(zhuǎn)鐵蛋白基因克隆與原核表達(dá)[D];西北民族大學(xué);2015年

8 高翠娥;飛蝗2個(gè)CYP450轉(zhuǎn)基因果蠅品系對(duì)殺蟲劑的敏感性及原核表達(dá)[D];山西大學(xué);2015年

9 吳雨航;布氏桿菌病間接ELISA方法的建立及吉林省梅花鹿主要養(yǎng)殖地區(qū)鹿布病血清學(xué)調(diào)查[D];吉林農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

10 姜旭;百合無癥病毒16kDα基因的克隆、原核表達(dá)及亞細(xì)胞定位[D];大連理工大學(xué);2015年

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