本文關鍵詞：TNF-α誘導滑膜MSCsMSCs與BMSCs凋亡的比較研究

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【摘要】：目的通過比較TNF-α誘導滑膜MSCs(synovium-derived MSCs,SMSCs)與BMSCs凋亡,探討SMSCs的抗凋亡能力。方法取患者自愿捐贈的滑膜組織及骨髓,分別采用組織貼壁法和密度梯度離心法分離培養(yǎng)SMSCs和BMSCs并傳代,取第3~5代細胞行細胞免疫表型及三系分化鑒定后進行實驗。實驗分為4組,其中SMSCs、BMSCs凋亡誘導組(SMSCs、BMSCs實驗組)用20 ng/m L TNF-α和10μg/m L放線菌酮對細胞進行凋亡誘導,其對應對照組以正常培養(yǎng)基培養(yǎng)。倒置相差顯微鏡下觀察凋亡誘導細胞形態(tài)變化;培養(yǎng)24 h取各組細胞,采用細胞計數(shù)試劑盒8及流式細胞術檢測細胞存活率及凋亡率,Western blot法檢測細胞半胱氨酶天冬氨酶蛋白酶降解產物8、3(Cleaved Caspase-8、3)的表達。結果經細胞表型及三系分化鑒定培養(yǎng)獲得的細胞均符合MSCs鑒定標準。倒置相差顯微鏡觀察示,隨凋亡誘導培養(yǎng)時間延長,兩實驗組細胞形態(tài)及生長均較對應的對照組差。培養(yǎng)24 h,兩對照組細胞存活率均為100%,未見細胞凋亡;SMSCs、BMSCs實驗組細胞存活率分別降至60.13%±8.63%及46.55%±10.54%,均顯著低于對照組(P0.05),SMSCs實驗組細胞存活率顯著高于BMSCs實驗組(t=3.152,P=0.006)。SMSCs和BMSCs對照組細胞凋亡率分別為1.12%±0.24%和1.35%±0.31%,兩實驗組分別增高至36.54%±8.63%及53.77%±11.52%,均顯著高于對照組(P0.05),且SMSCs實驗組細胞凋亡率顯著低于BMSCs實驗組(t=3.785,P=0.001)。兩對照組細胞Cleaved Caspase-8、3蛋白幾乎不表達,且SMSCs實驗組和BMSCs組細胞Cleaved Caspase-8、3蛋白明顯高表達;其中BMSCs實驗組明顯高于SMSCs實驗組(t=13.870,P=0.000;t=7.309,P=0.000)。結論經TNF-α誘導培養(yǎng),SMSCs凋亡明顯少于BMSCs,具有更強的抗凋亡能力。
【作者單位】： 中山大學孫逸仙紀念醫(yī)院骨外科;中山大學孫逸仙紀念醫(yī)院生物治療中心;
【關鍵詞】： 滑膜MSCs BMSCs TNF-α 細胞凋亡
【基金】：國家自然科學基金面上項目(81472102) 廣東省自然科學基金資助項目(2015A030313085)~~
【分類號】：R329.2
【正文快照】： MSCs是非血源性的具有多向分化能力的干細胞,可分化為成骨細胞、軟骨細胞、脂肪細胞及肌肉細胞等,被廣泛應用于組織工程和疾病治療研究[1]。BMSCs是常用的種子細胞之一,目前已有直接用于治療強直性脊柱炎等炎性疾病的報道[2]。但BMSCs移植后易發(fā)生凋亡,影響了其治療效果[3]。

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本文編號：937641