本文關(guān)鍵詞：不同CHO工程細(xì)胞株表達(dá)的VEGFR-Fc唾液酸化修飾的研究

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【摘要】：目的比較中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞(CHO)工程細(xì)胞株表達(dá)的VEGFR-Fc的唾液酸化程度的差異,為CHO工程細(xì)胞株的篩選提供參數(shù)依據(jù)。方法從唾液酸單糖、寡糖鏈這兩個(gè)層次分析VEGFR-Fc的唾液酸化程度。唾液酸單糖的定量:酸水解釋放出的唾液酸用熒光試劑1,2-diamino-4,5-methylenedioxybenzene(DMB)衍生后,采用熒光-親水保留液相色譜(HILIC-FLD)檢測(cè)。寡糖鏈的結(jié)構(gòu)分析:糖苷酶PNGase F釋放出的寡糖鏈經(jīng)鄰氨基苯甲酰胺(2-AB)衍生后,一部分利用陰離子交換色譜原理分析寡糖鏈上唾液酸的平均數(shù);一部分經(jīng)HILIC原理分析VEGFR-Fc寡糖鏈指紋圖譜。結(jié)果 6株工程細(xì)胞株表達(dá)的VEGFR-Fc唾液酸含量在3~12 mol NANA/mol蛋白之間,參考品Aflibercept為10.46 mol NANA/mol蛋白;每個(gè)寡糖鏈的唾液酸平均數(shù)在0.28~1.0之間;寡糖鏈的特征指紋譜圖顯示VEGFR-Fc有12個(gè)共有峰,各樣品、參考品均有以上共有峰,但各峰的峰高有差異。結(jié)論不同的CHO工程細(xì)胞株所表達(dá)的糖蛋白的唾液酸化程度存在差異。
【作者單位】： 安徽醫(yī)科大學(xué)生物化學(xué)與分子生物學(xué)教研室;安徽安科生物工程(集團(tuán))股份有限公司;
【關(guān)鍵詞】： 唾液酸 唾液酸化 糖基化 HILIC-FLD
【分類號(hào)】：R3411
【正文快照】： 2016-03-04接收糖蛋白是蛋白質(zhì)在翻譯后經(jīng)過糖基化修飾形成,被廣泛應(yīng)用于治療各種疾病,占據(jù)著較大的市場(chǎng)。糖基化作為蛋白質(zhì)翻譯后的主要修飾之一,調(diào)節(jié)并穩(wěn)定蛋白構(gòu)象,增加其可溶性,介導(dǎo)受體對(duì)蛋白的識(shí)別作用,影響蛋白類藥物的生物學(xué)活性[1-2]。因此,有必要對(duì)糖蛋白類生物藥物

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