本文關(guān)鍵詞：人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞在活體內(nèi)轉(zhuǎn)染方法的優(yōu)化選擇

  更多相關(guān)文章： 干細(xì)胞 移植 轉(zhuǎn)染 體內(nèi)

【摘要】：目的確定一種更加穩(wěn)定、有效的活體內(nèi)轉(zhuǎn)染干細(xì)胞的方法。方法從人的臍帶提取干細(xì)胞,體外培養(yǎng),并分別用PKH 26和慢病毒-GFP兩種方法標(biāo)記干細(xì)胞。取60只SD大鼠,隨機(jī)分成PKH 26轉(zhuǎn)染組和慢病毒-GFP轉(zhuǎn)染組,將用PKH 26和慢病毒-GFP標(biāo)記的第3代干細(xì)胞液分別注入大鼠門靜脈,繼續(xù)飼養(yǎng)。然后分別于轉(zhuǎn)染后第3 d、8 d及13 d時各處死大鼠10只,取出肝臟,用流式細(xì)胞儀檢測標(biāo)記轉(zhuǎn)染細(xì)胞百分比和凋亡細(xì)胞百分比并進(jìn)行比較。結(jié)果 PKH 26和慢病毒-GFP兩種方法標(biāo)記的第3代人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞呈梭形,PKH 26紅色染料可以均勻分布在干細(xì)胞的細(xì)胞膜內(nèi),標(biāo)記清晰;慢病毒-GFP標(biāo)記的干細(xì)胞在熒光顯微鏡下發(fā)出綠色熒光,清晰、穩(wěn)定。轉(zhuǎn)染后的干細(xì)胞在活體內(nèi)第3 d時,兩種方法轉(zhuǎn)染的干細(xì)胞在鏡下顏色清晰、明顯,區(qū)分度大,轉(zhuǎn)染效率高;但隨著時間的推移,PKH 26轉(zhuǎn)染的紅色逐漸變淡,顏色模糊,到第13 d時,干細(xì)胞的紅色逐漸消退;而慢病毒-GFP轉(zhuǎn)染的干細(xì)胞,3個時間點的顏色都較清晰,在第8 d時達(dá)到高峰。通過流式細(xì)胞儀檢測發(fā)現(xiàn),在第8 d和第13 d時慢病毒-GFP細(xì)胞轉(zhuǎn)染方法的效率明顯高于PKH 26轉(zhuǎn)染(P0.05),而兩種轉(zhuǎn)染方法的細(xì)胞凋亡率在3個時間點比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論慢病毒-GFP轉(zhuǎn)染是一種更加穩(wěn)定、高效的活體內(nèi)細(xì)胞示蹤方法,可用于活體內(nèi)細(xì)胞移植的長期觀察。
【作者單位】： 湖北醫(yī)藥學(xué)院附屬襄陽醫(yī)院普外科;
【關(guān)鍵詞】： 干細(xì)胞 移植 轉(zhuǎn)染 體內(nèi)
【分類號】：R329.2
【正文快照】： 間充質(zhì)干細(xì)胞是一類具有多向分化潛能的細(xì)胞,由于其運(yùn)用廣泛,越來越受到科學(xué)工作者們的關(guān)注。間充質(zhì)干細(xì)胞來源廣泛,牙髓、骨髓、脂肪等都可以提取。然而,從人臍帶提取的間充質(zhì)干細(xì)胞,具有同樣的分化潛能[1-4]且免疫原性更低、利用率更高等優(yōu)點[5],使得它更受科學(xué)工作者的歡迎

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