發(fā)布時間：2017-09-25 12:05

  本文關(guān)鍵詞：HPV16型E6蛋白單克隆抗體制備及檢測

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【摘要】：目的制備人乳頭瘤狀病毒(human papillomavirus,HPV)16型E6蛋白單克隆抗體并對其進(jìn)行檢測。方法 15只Balb-c小鼠分為3組,各5只。設(shè)計3條HPV16E6抗原多肽分別對3組小鼠進(jìn)行免疫,篩選得到對B細(xì)胞表位有較高活性的線性多肽HPE601,并用該組的小鼠脾臟制備雜交瘤細(xì)胞。采用間接ELISA法對小鼠血清進(jìn)行陽性克隆篩選和檢測抗體效價,采用考馬斯亮藍(lán)染色鑒定抗體純度,采用標(biāo)準(zhǔn)曲線計算抗體濃度,采用Western blot法檢測并采用間接免疫熒光法驗(yàn)證純化E6抗體對Caski、Hela和正常宮頸上皮細(xì)胞核蛋白特異性結(jié)合情況。行宮頸組織活檢患者20例,其中HPV16型宮頸組織7例,HPV18型宮頸組織6例和正常宮頸組織7例,采用免疫熒光法檢測單克隆抗體對3種組織的檢出率。結(jié)果制備得到單克隆抗體Whu001,經(jīng)鑒定抗體純度較好,該克隆能特異性識別HPV16型E6蛋白;Whu001對HPV16型組織的檢出率(80%)明顯高于HPV18型宮頸組織(15%)和正常宮頸組織(0),差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論成功篩選出了針對HPV16E6抗原的單克隆抗體,其對HPV16的診斷具有特異性,為在蛋白水平上檢測HPV E6蛋白提供了新途徑。
【作者單位】： 武漢大學(xué)人民醫(yī)院婦產(chǎn)科;
【關(guān)鍵詞】： 單克隆抗體 HPV型E蛋白 Balb-c小鼠
【基金】：國家自然科學(xué)基金(81302273) 湖北省衛(wèi)計委一般面上項(xiàng)目(WJ2015MB084) 湖北省科技廳科技項(xiàng)目支撐計劃(2015BCA313)
【分類號】：R392
【正文快照】： 持續(xù)性高危型人乳頭瘤狀病毒(humanpapillomavirus,HPV)感染是宮頸癌發(fā)生的主要原因[1]。高致病性HPV中以HPV16和HPV18型常見,其致癌性最強(qiáng),尤其是HPV16[2]。E6癌蛋白是HPV16型生命周期的主要蛋白之一,其可降解腫瘤抑制因子p53和pRB等,從而抑制細(xì)胞凋亡[3-4]。因此,E6和E7被認(rèn)，

本文編號：917238