本文關(guān)鍵詞：人氣管上皮細(xì)胞的原代分離及氣液界面培養(yǎng)

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【摘要】：目的分離人氣管上皮細(xì)胞,并進(jìn)行氣液界面(air-liquid interface,ALI)培養(yǎng),為呼吸道病毒研究提供良好的細(xì)胞模型。方法采用低溫消化法分離人氣管上皮細(xì)胞,用預(yù)包被膠原的0.4μm Transwell培養(yǎng)皿對(duì)傳代后的氣管上皮細(xì)胞進(jìn)行ALI培養(yǎng)。利用倒置顯微鏡觀察細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài),免疫細(xì)胞化學(xué)染色和免疫組化鑒定培養(yǎng)細(xì)胞的生長(zhǎng)和分化情況,同時(shí)測(cè)定細(xì)胞分化過程中的跨上皮電阻(trans epithelial electrical resistance,TEER)。結(jié)果分離培養(yǎng)的氣管上皮細(xì)胞光鏡下細(xì)胞形態(tài)及免疫熒光角蛋白染色陽性,證實(shí)培養(yǎng)細(xì)胞為氣管上皮細(xì)胞。ALI培養(yǎng)后的人氣管上皮細(xì)胞的形態(tài)學(xué)、MUC5AC蛋白、Ⅳ型β-微管蛋白(β-tubulinⅣ)的表達(dá)及緊密連接和假復(fù)層的形成情況均與人氣管組織結(jié)構(gòu)類似。結(jié)論低溫消化法可成功分離到活性高的上皮細(xì)胞。ALI培養(yǎng)的上皮細(xì)胞形態(tài)和功能與體內(nèi)接近,且能較長(zhǎng)時(shí)間維持其正常形態(tài)及功能,為呼吸道相關(guān)疾病的研究提供了理想的平臺(tái)。
【作者單位】： 中國疾病預(yù)防控制中心病毒病預(yù)防控制所;南京醫(yī)科大學(xué)附屬南京市兒童醫(yī)院;
【關(guān)鍵詞】： 氣管上皮細(xì)胞 原代分離 細(xì)胞培養(yǎng) 氣液界面
【分類號(hào)】：R329.2
【正文快照】： 氣液界面(air-liquid interface,ALI)培養(yǎng)是將氣管上皮細(xì)胞接種在預(yù)鋪膠原的多孔支持物上進(jìn)行培養(yǎng)的一種方法,培養(yǎng)成功后即會(huì)形成假復(fù)層纖毛柱狀上皮[1]。該模型培養(yǎng)的細(xì)胞在功能和結(jié)構(gòu)上均貼近體內(nèi)氣管上皮細(xì)胞的自然生長(zhǎng)狀態(tài),為研究氣管上皮的功能和相關(guān)疾病奠定了良好的基

【相似文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：905145