本文關(guān)鍵詞：人Th17細胞體外誘導(dǎo)分化條件的研究

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【摘要】：通過密度梯度離心法從人新鮮血液中分離獲得人外周血單核細胞(PBMCs),比較分析加入不同細胞極化因子(IL-1β、IL-6、TGF-β和IL-23)以及誘導(dǎo)不同時間(1,2,3,4 d)對Th17細胞分化的影響,利用流式細胞儀、ELISA方法以及Q-PCR技術(shù)考察相關(guān)指標,評估人體外Th17細胞的分化水平。研究表明,IL-1β、IL-6、TGF-β和IL-23單獨均能對Th17細胞的分化起到促進作用,聯(lián)用IL-1β、IL-6、TGF-β和IL-23時可使Th17細胞體外分化效率達到最佳。隨著誘導(dǎo)時間的延長,Th17細胞分化水平逐漸升高,培養(yǎng)3 d時達到峰值,繼續(xù)增加培養(yǎng)時間分化率反而出現(xiàn)降低。最終確立人Th17細胞體外分化的最佳誘導(dǎo)條件:在加入CD3抗體和CD28抗體的基礎(chǔ)上,同時加入IL-1β、IL-6、TGF-β以及IL-23共同培養(yǎng)人PBMCs3 d可有效地刺激人Th17細胞的分化,并且流式細胞檢測Th17細胞分化率達到近10%,ELISA檢測細胞上清液中IL-17A含量達到近3 ng/m L,Q-PCR方法分析IL-17 mRNA基因表達升高達15倍,此方案具有操作簡便、周期短、成本低廉等優(yōu)點,為Th17細胞的功能研究及相關(guān)疾病治療藥物的研發(fā)建立了有效的檢測平臺。
【作者單位】： 中國藥科大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院;
【關(guān)鍵詞】： 人外周血單核細胞 Th細胞 體外 誘導(dǎo)分化
【基金】：國家自然科學(xué)基金資助項目(No.81202450,No.81273426) 國家教育部博士點基金資助項目(No.20120096110007) 江蘇省高校研究生科技創(chuàng)新計劃資助項目(No.CXZZ13_0331)~~
【分類號】：R329.2
【正文快照】： 引用本文王辰,郭薇,王欣,等.人Th17細胞體外誘導(dǎo)分化條件的研究[J].中國藥科大學(xué)學(xué)報,2016,47(1):106-111.Cite this article as:WANG Chen,GUO Wei,WANG Xin,et al.Condition of human Th17 cell differentiation induced in vitro[J].J China PharmUniv,2016,47(1):106-111.

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