本文關(guān)鍵詞：L1-ORF2對GES-1細(xì)胞衰老的影響及分子調(diào)控機(jī)制研究

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【摘要】：目的探討長散在核元件1讀碼框2基因(L1-ORF2)對GES-1細(xì)胞衰老的影響及分子調(diào)控機(jī)制。方法采用高糖誘導(dǎo)法構(gòu)建GES-1細(xì)胞衰老模型,構(gòu)建L1-ORF2 si RNA載體,脂質(zhì)體法將其瞬時(shí)轉(zhuǎn)染正常及衰老的GES-1細(xì)胞,轉(zhuǎn)染48h后用細(xì)胞計(jì)數(shù)法繪制細(xì)胞生長曲線,流式細(xì)胞儀分析細(xì)胞周期,β-半乳糖苷酶染色檢測細(xì)胞衰老情況,Western blotting檢測轉(zhuǎn)染細(xì)胞中L1-ORF2、P53、P21蛋白表達(dá)水平。結(jié)果成功構(gòu)建了穩(wěn)定的GES-1細(xì)胞衰老模型及L1-ORF2si RNA載體。與轉(zhuǎn)染了陰性對照載體的細(xì)胞相比,轉(zhuǎn)染L1-ORF2 si RNA載體的正常及衰老GES-1細(xì)胞的L1-ORF2表達(dá)均下降(P0.05)。與轉(zhuǎn)染陰性對照載體的衰老GES-1細(xì)胞相比,轉(zhuǎn)染L1-ORF2 si RNA載體的衰老GES-1細(xì)胞增殖速度變快(P0.05),G0/G1期比例明顯減少(34.2%vs 39.3%,P0.05),β-半乳糖苷酶染色比例下降(56%vs 69%,P0.05),而轉(zhuǎn)染陰性對照載體和L1-ORF2 si RNA載體的正常GES-1細(xì)胞相比則無明顯差異(P0.05)。P53蛋白僅在衰老GES-1細(xì)胞中有表達(dá),在正常GES-1細(xì)胞中無表達(dá),而P21蛋白在正常和衰老的GES-1細(xì)胞中均有表達(dá),且后者表達(dá)更高(P0.05)。與轉(zhuǎn)染陰性對照載體的細(xì)胞相比,轉(zhuǎn)染L1-ORF2 si RNA載體的GES-1細(xì)胞P53、P21蛋白表達(dá)量明顯下降(P0.05)。結(jié)論L1-ORF2 si RNA載體可使正常及衰老的GES-1細(xì)胞中L1-ORF2表達(dá)下調(diào),促進(jìn)衰老GES-1細(xì)胞的生長和增殖,而對正常GES-1細(xì)胞無明顯影響。P53、P21蛋白參與了L1-ORF2調(diào)控細(xì)胞衰老的過程。
【作者單位】： 解放軍總醫(yī)院南樓消化內(nèi)科;
【關(guān)鍵詞】： 長核苷酸元件 開放讀碼框架 細(xì)胞衰老 RNA干擾
【分類號】：R339.38
【正文快照】： 衰老是一個(gè)復(fù)雜的過程,基因組穩(wěn)定性異常是發(fā)生衰老的根本因素[1]。基因組中大量的反轉(zhuǎn)錄轉(zhuǎn)座子被證實(shí)可以引起DNA損傷、重組和導(dǎo)致染色質(zhì)失穩(wěn)定。長散在核元件(long interspersed nuclear elements,LINEs)是重要的反轉(zhuǎn)錄轉(zhuǎn)座子,LINE-1(L1)是LINEs的重要成員,近年來許多研究結(jié)

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本文編號：854236