本文關(guān)鍵詞：骨髓源性脂肪祖細(xì)胞培養(yǎng)及生物學(xué)特性研究

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【摘要】：目的體外培養(yǎng)骨髓脂肪祖細(xì)胞(BMAPs),比較其與骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs)在形態(tài)、表型特征、成脂肪分化能力以及脂肪分化相關(guān)基因表達(dá)方面的差異。方法無菌取1~2月齡雄性SD大鼠的股骨和脛骨骨髓制作細(xì)胞懸液,EBM-2(含20%FBS、15μg/ml ECGs)培養(yǎng)基差速貼壁法培養(yǎng)第3次貼壁細(xì)胞,取傳代至第3~5代細(xì)胞用于實(shí)驗(yàn)。流式細(xì)胞分析檢測CD34、CD44、CD45及CD90表達(dá);STEMPRORAdipogenesis Differentiation Kit檢測細(xì)胞成脂肪分化能力;實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(real-time q PCR)檢測過氧化物酶體增殖激活受體γ(Ppaγ)、脂肪酸結(jié)合蛋白4(Fabp4)、脂蛋白脂肪酶(Lpl)、CCAAT/增強(qiáng)子結(jié)合蛋白α(Cebpa)、葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白4(Slc2a4)及前脂肪細(xì)胞因子1(pread1)m RNA表達(dá)水平。結(jié)果傳代接種培養(yǎng)24 h后,BMSCs形態(tài)上呈寬大、扁平狀,而BMAPs大部呈長三角狀;接種48 h后,BMSCs排列更為有序,而BMAPs多交織成網(wǎng)狀。BMAP表達(dá)CD34、CD44、CD45及CD90,BMSC表達(dá)CD44及CD90,未檢測到CD34和CD45表達(dá)。誘導(dǎo)培養(yǎng)后第4 d,BMAPs成脂率顯著高于BMSCs(P0.01);到第8 d,BMAPs成脂率為(87.2±11.67)%,BMSCs成脂率為(18.5±10.2)%,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。誘導(dǎo)分化后第4、8 d,Cebpa、Fabp4、Lp1、Ppaγ和Slc2a4 m RNA在BMAPs表達(dá)水平均顯著高于BMSCs(P0.01)。結(jié)論本實(shí)驗(yàn)獲得了1種具有干細(xì)胞的生物學(xué)特性,高表達(dá)脂肪分化相關(guān)的特異性基因,可高效均質(zhì)性地分化為脂肪細(xì)胞的BMAPs。
【作者單位】： 成都軍區(qū)昆明總醫(yī)院細(xì)胞生物治療中心干細(xì)胞與免疫細(xì)胞生物醫(yī)藥技術(shù)國家地方聯(lián)合實(shí)驗(yàn)室 云南省細(xì)胞治療技術(shù)轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;昆明醫(yī)科大學(xué)成都軍區(qū)昆明總醫(yī)院臨床學(xué)院;
【關(guān)鍵詞】： 骨髓 脂肪祖細(xì)胞 間充質(zhì)干細(xì)胞 脂肪細(xì)胞 分化
【基金】：國家科技支撐計(jì)劃項(xiàng)目(2014BI01B00) 國家自然科學(xué)基金(81170316) 云南省科技計(jì)劃項(xiàng)目(20111HB050,2013DA004)
【分類號】：R329.2
【正文快照】： 骨質(zhì)疏松癥患者往往伴隨了骨髓肥胖,而骨髓脂肪細(xì)胞的生成造成的骨髓脂肪堆積是促進(jìn)骨髓疏松癥發(fā)病進(jìn)程的關(guān)鍵[1]。骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs)可以向脂肪細(xì)胞分化,但其成脂肪分化能力并不一致。文獻(xiàn)報(bào)道,人原代培養(yǎng)的BMSC在體外誘導(dǎo)時(shí),絕大部分細(xì)胞并不能分化為脂肪細(xì)胞[2],因此

【相似文獻(xiàn)】

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本文編號：852087