本文關(guān)鍵詞：十二指腸鉤蟲抗凝肽AduNAP1的原核表達(dá)及其抗凝活性研究

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【摘要】：目的分離、克隆十二指腸鉤蟲抗凝肽AduNAP1基因,在大腸埃希菌中重組表達(dá)AduNAP1,并檢測其抗凝活性。方法以十二指腸鉤蟲成蟲cDNA為模板,PCR擴(kuò)增AduNAP1成熟肽編碼序列,并克隆、連接到表達(dá)質(zhì)粒pET32a-sumo,構(gòu)建原核表達(dá)載體pET32a-sumo/AduNAP1。重組載體轉(zhuǎn)入到大腸埃希菌BL21(DE3)中,用IPTG誘導(dǎo)表達(dá)。重組產(chǎn)物經(jīng)Ni親和層析后用SUMO蛋白酶酶切融合伴侶,純化獲得重組目的多肽。用SDS-PAGE分析蛋白表達(dá)及純化情況,用凝血時間法(PT及aPTT)檢測重組多肽的抗凝活性。結(jié)果擴(kuò)增并克隆AduNAP1成熟肽編碼序列,構(gòu)建的原核表達(dá)載體pET32a-sumo/AduNAP-1轉(zhuǎn)化大腸埃希菌表達(dá)rAduNAP1。純化的rAduNAP1能延長PT及aPTT,但延長PT作用更為顯著,其延長2倍PT及aPTT時間所需的濃度分別約為142nmol/L及406nmol/L。結(jié)論構(gòu)建rAduNAP1表達(dá)載體,其表達(dá)產(chǎn)物具有較強(qiáng)抗凝活性,為進(jìn)一步了解AduNAP1的生物學(xué)功能及作為抗凝新藥開發(fā)應(yīng)用奠定了基礎(chǔ)。
【作者單位】： 廣東醫(yī)科大學(xué)寄生蟲學(xué)暨臨床寄生蟲檢驗(yàn)學(xué)教研室;廣東醫(yī)科大學(xué)藥理學(xué)教研室;
【關(guān)鍵詞】： 十二指腸鉤蟲 抗凝肽 原核表達(dá) 抗凝活性
【基金】：國家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(No.31101639) 廣東省自然科學(xué)基金重點(diǎn)項(xiàng)目(No.S2013020012893) 廣東省高等學(xué)校人才引進(jìn)專項(xiàng)(No.2050205)
【分類號】：R383.13
【正文快照】： *?**?鉤蟲(hookworm)是人體及動物常見寄生線蟲,寄生于人體的主要有十二指腸鉤蟲(Ancylostoma du-odenale)及美洲鉤蟲(Necator americanus)。鉤蟲寄生于腸道,主要危害是引起貧血。鉤蟲對人類健康危害嚴(yán)重,曾位列我國5大寄生蟲之一,目前估計(jì)全球感染人數(shù)約4.4億[1]。鉤蟲寄生引

【相似文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前6條

1 陳桂光;沙人玨;曾國琦;蘇慶平;洪凌仙;;十二指腸鉤蟲感染金色地鼠(Mesocricetus auratus)初步報(bào)道[J];福建醫(yī)大學(xué)報(bào);1980年00期

2 張振林;鄧?yán)?楊陳;彭禮飛;;十二指腸鉤蟲天冬氨酸蛋白酶抑制劑的克隆與表達(dá)[J];中國熱帶醫(yī)學(xué);2009年07期

3 黃先翔,尹光耀,李明惠;十二指腸鉤蟲14日齡童蟲體外培養(yǎng)至成蟲的研究[J];中國寄生蟲學(xué)與寄生蟲病雜志;1988年03期

4 邵正;鄧?yán)?何慶豐;彭禮飛;;十二指腸鉤蟲巨噬細(xì)胞遷移抑制因子基因的克隆和表達(dá)[J];中國病原生物學(xué)雜志;2012年05期

5 夏曉玲;俞敏;孫煒;;十二指腸鉤蟲ASP-2基因密碼子優(yōu)化及在大腸桿菌中高效表達(dá)[J];南京醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);2014年05期

6 ;[J];;年期

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本文編號：841855