本文關(guān)鍵詞：兔抗小鼠IL-23p19多克隆抗體的制備和鑒定

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【摘要】：目的制備兔抗小鼠白細胞介素23p19(IL-23p19)多克隆抗體。方法利用分子克隆技術(shù)構(gòu)建重組表達質(zhì)粒p ET-16b-IL-23p19,轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21(DE3),異丙基-β-D-硫代半乳糖吡喃糖苷(IPTG)誘導蛋白表達,SDS-PAGE及Western blot法分析鑒定蛋白,鎳柱親和層析純化制備蛋白;以此蛋白為免疫抗原免疫新西蘭大白兔,獲得抗血清,并利用親和層析法純化抗血清,制備兔抗小鼠IL-23p19多克隆抗體;采用ELISA檢測抗體效價;Western blot法檢測抗體特異性。結(jié)果重組表達載體p ET-16b-IL-23p19構(gòu)建正確且IL-23p19蛋白能夠在大腸桿菌BL21(DE3)中有效表達。通過多次IL-23p19蛋白免疫新西蘭大白兔,成功制備兔抗小鼠IL-23p19多克隆抗體。ELISA檢測確定新西蘭大白兔血清效價達1∶256 000,Western blot法證實兔抗小鼠IL-23p19多克隆抗體能特異性識別小鼠IL-23p19蛋白。結(jié)論成功制備了兔抗小鼠IL-23p19多克隆抗體,抗體具有高的效價和較好的特異性。
【作者單位】： 鄭州大學生命科學學院分子免疫實驗室;鄭州大學河南省醫(yī)藥科學研究院;
【關(guān)鍵詞】： IL-p 原核表達 蛋白純化 抗體制備
【基金】：重大新藥創(chuàng)制科技重大專項(2012ZX09103301-022) 國家自然科學基金(U1204817,81373119,81571526) 河南省教育廳基金(16A180019)
【分類號】：R392.11
【正文快照】： 白細胞介素23(interleukin 23,IL-23)是2000年發(fā)現(xiàn)確定的一種細胞因子。Oppmann等[1]在研究IL-6家族細胞因子時發(fā)現(xiàn)了一組新的c DNA序列,其編碼的一種四螺旋束細胞因子被命名為p19。p19單獨存在時無生物學活性,當其與IL-12共用p40亞基結(jié)合后形成一種異源二聚體的細胞因子,才能

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本文編號：820304