本文關(guān)鍵詞：安氏隱孢子蟲ATP結(jié)合盒式轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白1基因的克隆與離子轉(zhuǎn)運(yùn)

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【摘要】：目的研究安氏隱孢子蟲(Cryptosporidium andersoni)ATP結(jié)合盒式轉(zhuǎn)運(yùn)(ATP-binding cassette,ABC)蛋白1基因?qū)?xì)胞內(nèi)液和細(xì)胞外液中K~+、Ca~(2+)、Na~+和Mg~(2+)的轉(zhuǎn)運(yùn)作用。方法設(shè)計(jì)特異性引物,從安氏隱孢子蟲基因組中PCR擴(kuò)增CaABC1。構(gòu)建真核表達(dá)質(zhì)粒pEGFP-C1-CaABC1,采用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染至小鼠腸上皮細(xì)胞(intestinal epithelial cells,IEC)中表達(dá),設(shè)空白組(未轉(zhuǎn)染質(zhì)粒組)、對(duì)照組(轉(zhuǎn)染空質(zhì)粒pEGFP-C1組)和轉(zhuǎn)染組(轉(zhuǎn)染重組質(zhì)粒pEGFP-C1-CaABC1組)。用溶液離子濃度檢測試劑盒檢測IEC細(xì)胞內(nèi)液和細(xì)胞外液中的K~+、Ca~(2+)、Na~+和Mg~(2+)的濃度。結(jié)果擴(kuò)增出544 bp的CaABC1基因,構(gòu)建了真核表達(dá)質(zhì)粒載體pEGFP-C1-CaABC1。轉(zhuǎn)染小鼠IEC后,空白組未觀察到綠色熒光,對(duì)照組和轉(zhuǎn)染組均觀察到綠色熒光。在細(xì)胞內(nèi)液中,空白組K~+、Ca~(2+)、Na~+和Mg~(2+)的濃度分別為(5.51±0.51)、(1.98±0.06)、(108.33±1.33)和(0.93±0.03)mmol/L,對(duì)照組分別為(6.25±0.70)、(1.90±0.13)、(107.73±1.79)和(0.87±0.05)mmol/L,轉(zhuǎn)染組分別為(14.84±0.90)、(3.40±0.14)、(127.64±1.49)和(1.72±0.20)mmol/L。在細(xì)胞外液中,空白組K~+、Ca~(2+)、Na~+和Mg~(2+)的濃度分別為(12.72±0.83)、(3.72±0.03)、(116.83±1.04)和(2.02±0.18)mmol/L,對(duì)照組分別為(10.11±0.90)、(3.58±0.06)、(115.89±1.86)和(1.71±0.41)mmol/L,轉(zhuǎn)染組分別為(5.77±0.21)、(1.29±0.18)、(96.21±1.19)和(0.64±0.02)mmol/L。轉(zhuǎn)染組K~+、Ca~(2+)和Mg~(2+)與對(duì)照組相比,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論CaABC1蛋白具有協(xié)助轉(zhuǎn)運(yùn)K~+、Ca~(2+)和Mg~(2+)離子的作用。
【作者單位】： 安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院;安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)茶與食品學(xué)院;
【關(guān)鍵詞】： 安氏隱孢子蟲 ATP結(jié)合盒式轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白基因 克隆 離子轉(zhuǎn)運(yùn)
【基金】：國家自然科學(xué)基金(No.31001019) 安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)科骨干建設(shè)項(xiàng)目(No.2014XKPY-21)~~
【分類號(hào)】：R382.3
【正文快照】： 隱孢子蟲病是由隱孢子蟲感染引起的人獸共患寄生蟲病[1]。隱孢子蟲是一類重要的機(jī)會(huì)性致病原蟲,進(jìn)入宿主機(jī)體后寄生于胃腸道上皮細(xì)胞,導(dǎo)致人和動(dòng)物嚴(yán)重腹瀉[2]。隨著對(duì)隱孢子蟲病的認(rèn)識(shí)和檢測技術(shù)的發(fā)展,研究人員試圖通過建立隱孢子蟲感染動(dòng)物模型或體外模型來研究治療隱孢子

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本文編號(hào)：781922