本文關(guān)鍵詞：神經(jīng)酰胺在MCLR引起的HL7702細(xì)胞PP2A亞基及其底物改變中作用的探討

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【摘要】：研究背景：微囊藻毒素LR (MCLR, microcystin-LR)是微囊藻毒素中存在最為普遍且毒性作用最明顯的一種。MCLR是蛋白磷酸酶2A(PP2A, protein phoshatase2A)的強(qiáng)抑制劑,對(duì)PP2A的抑制作用可能是造成其致毒作用機(jī)制錯(cuò)綜復(fù)雜的原因之一。神經(jīng)酰胺是細(xì)胞對(duì)外界環(huán)境刺激產(chǎn)生的一類主要的第二信使,PP2A/B55a亞基和PP2A/B56a亞基可被神經(jīng)酰胺激活。本實(shí)驗(yàn)室的前期研究發(fā)現(xiàn),MCLR能夠刺激人胚腎細(xì)胞HEK293和小鼠腎臟中神經(jīng)酰胺水平的升高,升高的神經(jīng)酰胺上調(diào)了HEK293細(xì)胞中PP2A/B55a以及PP2A/B56a這兩種調(diào)節(jié)亞基的蛋白水平。本研究擬探討MCLR染毒入肝細(xì)胞HL7702后神經(jīng)酰胺在PP2A亞基改變及其底物蛋白磷酸化水平改變中的作用。 研究方法：以人肝細(xì)胞系HL7702為模型,對(duì)細(xì)胞用MCLR染毒及用神經(jīng)酰胺合成酶抑制劑Desipramine (DESI)處理,應(yīng)用免疫熒光技術(shù)檢測(cè)神經(jīng)酰胺水平,用免疫印跡技術(shù)檢測(cè)PP2A各亞基蛋白水平及其底物MAPK、c-myc、Raf-1、Akt、 bcl-2、Ezrin、VASP和Hsp27的總蛋白及磷酸化蛋白水平,用Hoechst33342染核方法檢測(cè)細(xì)胞凋亡。 研究結(jié)果：1MCLR對(duì)HL7702細(xì)胞處理24小時(shí)后,神經(jīng)酰胺水平明顯升高。用10μM DESI與MCLR共處理HL7702細(xì)胞后,神經(jīng)酰胺水平的上升得到了抑制。2. MCLR與DESI共處理細(xì)胞后,MCLR引起的PP2A/B55a和PP2A/B56a蛋白水平上調(diào)效應(yīng)消除。但是DESI共處理不影響MCLR引起的PP2A/A和PP2A/C亞基蛋白水平的變化。3MCLR影響了PP2A底物MAPK c-myc、Raf-l、Akt、bcl-2、Ezrin、VASP、Hsp27的磷酸化水平,其中c-myc、Akt、bcl-2、Hsp27在加入DESI后其磷酸化水平的升高被抑制。4.雖然bcl-2的磷酸化水平上升,但未檢測(cè)出MCLR對(duì)HL7702細(xì)胞的細(xì)胞凋亡產(chǎn)生可見(jiàn)影響,DESI的加入也沒(méi)有改變這個(gè)結(jié)果。 研究結(jié)論：HL7702細(xì)胞在受到MCLR刺激后,主要經(jīng)神經(jīng)酰胺合成途徑使神經(jīng)酰胺水平升高；升高的神經(jīng)酰胺上調(diào)了PP2A/B55a以及PP2A/B56a這兩種調(diào)節(jié)亞基的蛋白水平；與此同時(shí),也影響了MCLR引起的PP2A底物c-myc、Akt、 bcl-2、Hsp27蛋白磷酸化水平的升高。表明在MCLR的作用過(guò)程中,神經(jīng)酰胺可能起到了一定的調(diào)節(jié)作用,但具體的機(jī)制還有待深入研究。
【關(guān)鍵詞】：微囊藻毒素 人肝細(xì)胞 神經(jīng)酰胺 蛋白磷酸酶2A 絲裂原激活的蛋白激酶 凋亡相關(guān)蛋白 骨架相關(guān)蛋白 細(xì)胞凋亡
【學(xué)位授予單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R329.2
【目錄】：

• 致謝4-5
• 中文摘要5-7
• Abstract7-9
• 縮略詞表9-10
• 目錄10-12
• 1 前言12-16
• 2 實(shí)驗(yàn)材料16-21
• 3 實(shí)驗(yàn)方法21-25
• 4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果25-45
• 4.1 MCLR刺激HL7702細(xì)胞的神經(jīng)酰胺水平升高25
• 4.2 神經(jīng)酰胺合成酶抑制劑DESI抑制神經(jīng)酰胺的合成25-28
• 4.3 MCLR刺激HL7702細(xì)胞調(diào)節(jié)PP2A亞基水平可能與神經(jīng)酰胺有關(guān)28-30
• 4.4 神經(jīng)酰胺在MCLR誘導(dǎo)的MAPK通路磷酸化水平改變中的作用30-36
• 4.4.1 神經(jīng)酰胺沒(méi)有影響MCLR引起的Raf-1磷酸化水平的改變30-32
• 4.4.2 神經(jīng)酰胺沒(méi)有影響MCLR引起的ERK1/2,p38,JNK磷酸化水平的改變32
• 4.4.3 MCLR引起MAPK下游轉(zhuǎn)錄因子c-myc的磷酸化可能與神經(jīng)酰胺有關(guān)32-36
• 4.5 神經(jīng)酰胺在MCLR影響細(xì)胞存活/凋亡相關(guān)蛋白磷酸化水平中的作用36-39
• 4.5.1 MCLR影響Akt蛋白磷酸化水平可能與神經(jīng)酰胺有關(guān)36
• 4.5.2 MCLR影響bcl-2蛋白水平及其磷酸化水平可能與神經(jīng)酰胺有關(guān)36-39
• 4.6 神經(jīng)酰胺在MCLR影響細(xì)胞骨架相關(guān)蛋白磷酸化水平中的作用39-44
• 4.6.1 神經(jīng)酰胺沒(méi)有影響MCLR引起的Ezrin磷酸化水平的改變39
• 4.6.2 神經(jīng)酰胺沒(méi)有影響MCLR引起的VASP磷酸化水平的改變39-42
• 4.6.3 MCLR影響Hsp27蛋白磷酸化水平可能與神經(jīng)酰胺有關(guān)42-44
• 4.7 MCLR對(duì)HL7702細(xì)胞凋亡沒(méi)有影響44-45
• 5 討論45-51
• 5.1 MCLR通過(guò)刺激HL7702細(xì)胞生成神經(jīng)酰胺來(lái)調(diào)節(jié)PP2A亞基的蛋白水平45-46
• 5.2 MCLR激活MAPK通路及其引起下游轉(zhuǎn)錄因子o-myc的磷酸化可能與神經(jīng)酰胺有關(guān)46-48
• 5.3 MCLR影響細(xì)胞存活/凋亡相關(guān)蛋白可能與神經(jīng)酰胺有關(guān)48
• 5.4 MCLR影響細(xì)胞骨架相關(guān)蛋白可能與神經(jīng)酰胺有關(guān)48-51
• 6 結(jié)論51-52
• 參考文獻(xiàn)52-59
• 綜述59-70
• 摘要59
• 1 14-3-3蛋白的分子結(jié)構(gòu)59-60
• 2 14-3-3蛋白的功能60-62
• 3 14-3-3蛋白的作用機(jī)制62-63
• 4 14-3-3蛋白與腫瘤的關(guān)系63-64
• 5 展望64-65
• 參考文獻(xiàn)65-69
• Abstract69-70
• 作者簡(jiǎn)歷及在學(xué)期間參加的科研工作70

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前2條

1 ;Effect of microcystin-LR on protein phosphatase 2A and its function in human amniotic epithelial cells[J];Journal of Zhejiang University-Science B(Biomedicine & Biotechnology);2011年12期

2 張金強(qiáng),王妍,王濤,杜芝燕,徐元基,陸應(yīng)麟;肺巨細(xì)胞癌高低轉(zhuǎn)移株差異表達(dá)基因的鑒定[J];中華腫瘤雜志;2004年10期

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本文編號(hào)：773171