本文關(guān)鍵詞：Alpha-突觸核蛋白A53T轉(zhuǎn)基因帕金森病模型小鼠早期嗅覺(jué)及學(xué)習(xí)記憶能力的研究

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【摘要】：帕金森病(parkinson’s diseases;PD)是一種典型的神經(jīng)退變性疾病,其神經(jīng)病理學(xué)表現(xiàn)為黑質(zhì)多巴胺(dopamine;DA)能神經(jīng)元選擇性變性死亡,以及神經(jīng)元內(nèi)α-突觸核蛋白過(guò)度聚積,形成路易小體。PD的經(jīng)典臨床癥狀為靜止性震顫,肌強(qiáng)直,運(yùn)動(dòng)遲緩和姿勢(shì)反射障礙。然而,一些非運(yùn)動(dòng)癥狀,例如焦慮、嗅覺(jué)障礙、認(rèn)知功能減退、空間學(xué)習(xí)與記憶能力損傷等會(huì)在運(yùn)動(dòng)障礙出現(xiàn)之前或者伴隨運(yùn)動(dòng)癥狀出現(xiàn)。但這些非運(yùn)動(dòng)癥狀產(chǎn)生的機(jī)制還不清楚,如能了解PD發(fā)病過(guò)程中嗅覺(jué)、學(xué)習(xí)記憶能力障礙等非運(yùn)動(dòng)癥狀的神經(jīng)機(jī)制并在早期進(jìn)行干預(yù),將有助于從根本上延緩或阻止PD的發(fā)病進(jìn)程。α-突觸核蛋白A53T轉(zhuǎn)基因小鼠模型是研究α-突觸核蛋白聚積在PD發(fā)生發(fā)展中作用的理想動(dòng)物模型,該模型可模擬PD發(fā)展進(jìn)程中神經(jīng)病理學(xué)改變的過(guò)程,運(yùn)動(dòng)癥狀出現(xiàn)較晚,是研究PD非運(yùn)動(dòng)癥狀的理想動(dòng)物模型。但當(dāng)前對(duì)于該小鼠成模過(guò)程中是否出現(xiàn)嗅覺(jué)的改變尚未見(jiàn)報(bào)道,而對(duì)其在成模過(guò)程中學(xué)習(xí)與記憶功能的研究結(jié)果也不盡相同。另外,成年神經(jīng)發(fā)生對(duì)嗅覺(jué)識(shí)別、空間學(xué)習(xí)與記憶具有重要的調(diào)節(jié)作用,研究表明,在α-突觸核蛋白聚積和神經(jīng)元發(fā)生退行性變之前,即出現(xiàn)成年神經(jīng)發(fā)生的異常。成年神經(jīng)發(fā)生主要存在于大腦的兩個(gè)區(qū)域,一個(gè)是海馬齒狀回顆粒細(xì)胞下層,該區(qū)域的成年神經(jīng)發(fā)生與空間學(xué)習(xí)記憶能力有關(guān);另一個(gè)是側(cè)腦室室管膜下層,此區(qū)域的神經(jīng)發(fā)生通過(guò)嘴側(cè)遷移流遷移到嗅球,參與嗅覺(jué)識(shí)別過(guò)程。α-突觸核蛋白A53T轉(zhuǎn)基因小鼠嗅覺(jué)及學(xué)習(xí)記憶能力的改變,是否和上述兩個(gè)區(qū)域的神經(jīng)發(fā)生相關(guān)亦未見(jiàn)報(bào)道。因此,本實(shí)驗(yàn)擬以α-突觸核蛋白A53T轉(zhuǎn)基因PD模型小鼠為觀察對(duì)象,首先綜合應(yīng)用高架十字迷宮、嗅聞識(shí)別、精細(xì)嗅聞識(shí)別、轉(zhuǎn)棒實(shí)驗(yàn)、水迷宮以及條件恐懼等一系列行為學(xué)實(shí)驗(yàn)方法,探討小鼠在模型早期焦慮樣行為、嗅覺(jué)、以及學(xué)習(xí)與記憶能力的變化,并分析上述改變與運(yùn)動(dòng)癥狀的相關(guān)性。繼而應(yīng)用免疫熒光染色的方法觀察海馬齒狀回顆粒細(xì)胞下層和側(cè)腦室室管膜下層的神經(jīng)發(fā)生情況,來(lái)探討上述行為學(xué)改變的可能機(jī)制。實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下:1.高架十字迷宮實(shí)驗(yàn)表明,6月齡a53t轉(zhuǎn)基因組小鼠在開(kāi)放臂的時(shí)間顯著長(zhǎng)于對(duì)照組(p0.05),表明6月齡a53t轉(zhuǎn)基因小鼠出現(xiàn)抗焦慮癥狀;12月齡a53t轉(zhuǎn)基因組小鼠的活動(dòng)距離顯著多于對(duì)照組(p0.05),表明12月齡a53t轉(zhuǎn)基因小鼠運(yùn)動(dòng)更活躍。2.嗅聞識(shí)別實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,3、6、9和12月齡對(duì)照組小鼠嗅聞新墊料的時(shí)間明顯少于嗅聞舊墊料的時(shí)間(p0.05),3、6、9和12月齡a53t轉(zhuǎn)基因組小鼠嗅聞新舊墊料的時(shí)間無(wú)顯著差異(p0.05),表明a53t轉(zhuǎn)基因小鼠嗅覺(jué)識(shí)別功能異常。3.精細(xì)嗅聞識(shí)別實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,12月齡a53t轉(zhuǎn)基因組小鼠對(duì)兩種不同混合濃度氣味的正確識(shí)別率顯著低于對(duì)照組(p0.05),說(shuō)明12月齡a53t轉(zhuǎn)基因小鼠的精細(xì)嗅聞識(shí)別功能出現(xiàn)障礙。4.轉(zhuǎn)棒儀實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,12月齡a53t轉(zhuǎn)基因組小鼠停留在轉(zhuǎn)棒上的時(shí)間明顯長(zhǎng)于對(duì)照組(p0.05),說(shuō)明12月齡a53t轉(zhuǎn)基因小鼠的運(yùn)動(dòng)協(xié)調(diào)能力無(wú)損傷且優(yōu)于對(duì)照組。5.水迷宮實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,第3天測(cè)試時(shí)3月齡a53t轉(zhuǎn)基因組小鼠在原平臺(tái)所在象限的探尋時(shí)間顯著高于其他象限(p0.05),第7天時(shí)對(duì)照組小鼠在原平臺(tái)所在象限的探尋時(shí)間顯著高于其他象限(p0.05)。reverselearning結(jié)果表明第3天時(shí)3月齡a53t轉(zhuǎn)基因小鼠記住平臺(tái)所在象限,第5天時(shí)對(duì)照組小鼠記住平臺(tái)所在象限。第3天測(cè)試時(shí)9月齡a53t轉(zhuǎn)基因組小鼠在原平臺(tái)所在象限的探尋時(shí)間顯著高于其他象限(p0.05),第7天時(shí)對(duì)照組小鼠在原平臺(tái)所在象限的探尋時(shí)間顯著高于其他象限(p0.05)。reverselearning結(jié)果表明第5天9月齡a53t轉(zhuǎn)基因小鼠記住平臺(tái)所在象限,第6天時(shí)對(duì)照組小鼠記住平臺(tái)所在象限,表明a53t轉(zhuǎn)基因小鼠的空間學(xué)習(xí)與記憶能力增強(qiáng)。6.場(chǎng)景恐懼條件反射實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,3月齡a53t轉(zhuǎn)基因組小鼠在無(wú)電擊的場(chǎng)景a中僵立時(shí)間明顯長(zhǎng)于對(duì)照組(p0.05),表明3月齡a53t轉(zhuǎn)基因小鼠的空間記憶能力更強(qiáng)。7.免疫熒光染色結(jié)果表明,3月齡A53T轉(zhuǎn)基因組小鼠的側(cè)腦室室管膜下層、海馬齒狀回顆粒細(xì)胞下層的BrdU+神經(jīng)元及BrdU+/DCX+雙標(biāo)的細(xì)胞數(shù)目與對(duì)照組比較無(wú)顯著差異(P0.05)。綜上所述,我們發(fā)現(xiàn)3、9月齡A53T轉(zhuǎn)基因小鼠的空間學(xué)習(xí)與記憶能力和對(duì)照組相比顯著增強(qiáng),6月齡A53T轉(zhuǎn)基因小鼠開(kāi)始出現(xiàn)焦慮減少、嗅聞識(shí)別障礙,12月齡A53T轉(zhuǎn)基因小鼠出現(xiàn)運(yùn)動(dòng)活躍現(xiàn)象。這些研究表明A53T轉(zhuǎn)基因小鼠早期出現(xiàn)焦慮減少、嗅覺(jué)減退、空間學(xué)習(xí)與記憶能力增強(qiáng)的癥狀,并且早于運(yùn)動(dòng)癥狀的發(fā)生。免疫熒光染色結(jié)果表明這些現(xiàn)象可能與小鼠成年神經(jīng)發(fā)生無(wú)關(guān)。因此介導(dǎo)這一過(guò)程的具體分子機(jī)制還有待進(jìn)一步研究。
【關(guān)鍵詞】：A53T小鼠 帕金森病 嗅覺(jué) 學(xué)習(xí)記憶
【學(xué)位授予單位】：青島大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R742.5;R-332
【目錄】：

• 摘要2-5
• abstract5-9
• 引言9-11
• 材料和方法11-16
• 1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物11
• 2 基因鑒定試劑和耗材11-12
• 3 免疫組織化學(xué)試劑和耗材12-13
• 4 實(shí)驗(yàn)倫理13
• 5 行為學(xué)實(shí)驗(yàn)13-14
• 6 行為學(xué)方法14-16
• 6.1 高架十字迷宮實(shí)驗(yàn) (Elevated plus maze)14
• 6.2 嗅聞識(shí)別實(shí)驗(yàn) (Olfactory discrimination)14
• 6.3 精細(xì)嗅聞識(shí)別實(shí)驗(yàn) (Fine odor discrimination)14-15
• 6.4 轉(zhuǎn)棒實(shí)驗(yàn) (Rota-rod)15
• 6.5 Morris水迷宮實(shí)驗(yàn) （Morris water maze）15
• 6.6 場(chǎng)景條件恐懼實(shí)驗(yàn) （Contextual fear conditioning）15-16
• 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理16-17
• 實(shí)驗(yàn)結(jié)果17-37
• 1. 高架十字迷宮實(shí)驗(yàn)結(jié)果17-19
• 2. 嗅聞識(shí)別實(shí)驗(yàn)結(jié)果19-20
• 3. 精細(xì)嗅聞識(shí)別實(shí)驗(yàn)結(jié)果20-22
• 4. 轉(zhuǎn)棒儀實(shí)驗(yàn)結(jié)果22-23
• 5. 水迷宮實(shí)驗(yàn)結(jié)果23-31
• 6. 場(chǎng)景恐懼條件反射實(shí)驗(yàn)結(jié)果31-33
• 7. 免疫熒光染色結(jié)果33-37
• 討論37-39
• 結(jié)論39-40
• 參考文獻(xiàn)40-45
• 綜述45-57
• 綜述參考文獻(xiàn)51-57
• 讀學(xué)位期間發(fā)表的論文、參加的會(huì)議和參與的課題情況57-58
• 致謝58-59

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前2條

1 李萍;;腦深部電刺激治療帕金森病患者的護(hù)理配合[J];中國(guó)地方病防治雜志;2014年S1期

2 李存江 ,徐敏;帕金森病患者的飲食營(yíng)養(yǎng)原則[J];中老年保健;2005年04期

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本文編號(hào)：765236