本文關(guān)鍵詞：NK92細(xì)胞經(jīng)非溶酶體途徑快速生成并釋放35kD顆粒酶B至靶細(xì)胞

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【摘要】：目的探討NK92細(xì)胞能否經(jīng)非分泌型溶酶體途徑分泌顆粒酶B(GZB)以及其可能的分泌機(jī)制。方法 NK92細(xì)胞作為細(xì)胞模型,經(jīng)佛波酯(PMA)和離子霉素(ION)活化后4 h內(nèi),采用免疫熒光染色和膠體金標(biāo)記免疫電鏡技術(shù)檢測NK92細(xì)胞胞質(zhì)中蛋白合成功能被抑制前后相對分子質(zhì)量(M_r)35 000和32 000 GZB的含量及其分布情況;采用Western blot法檢測分離純化分泌型溶酶體(SL)及不含溶酶體胞質(zhì)中的GZB種類;通過EDTA抑制溶酶體的胞吐來阻斷M_r32 000 GZB的釋放,觀察活化后NK92細(xì)胞上清中的M_r35 000 GZB含量;將活化的NK92細(xì)胞與K562細(xì)胞共培養(yǎng),觀察M_r35 000 GZB能否進(jìn)入K562細(xì)胞;觀察活化后NK92細(xì)胞的死亡率,并檢測其分泌M_r35 000 GZB的酶活性。結(jié)果 NK92細(xì)胞PMA/ION刺激4 h后,在SL外的胞質(zhì)中生成大量GZB,M_r為35 000區(qū)別于SL內(nèi)GZB的M_r32 000。經(jīng)免疫電鏡和免疫熒光染色進(jìn)一步顯示,這些GZB位于溶酶體外的小囊泡內(nèi)。同時,M_r35 000 GZB能被分泌至細(xì)胞外。進(jìn)一步檢測發(fā)現(xiàn)受到刺激的NK92細(xì)胞在SL外的胞質(zhì)中同時出現(xiàn)GZB/絲氨酸蛋白酶抑制劑9(serpinb9)復(fù)合物以及M_r35 000 GZB,但死亡率未上升,與之相應(yīng)的是SL內(nèi)的GZB具有酶活性,SL外的M_r35 000 GZB為酶原形式,表明M_r35 000 GZB并非由SL漏出。結(jié)論人NK細(xì)胞內(nèi)存在SL外無酶活性的M_r35 000 GZB,以非溶酶體途徑快速生成方式分泌至細(xì)胞外,提供了部分細(xì)胞外的GZB。
【作者單位】： 湖北中醫(yī)藥大學(xué)檢驗學(xué)院;華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院免疫學(xué)系;
【關(guān)鍵詞】： 顆粒酶B NK細(xì)胞 分泌型溶酶體 細(xì)胞凋亡
【基金】：國家自然科學(xué)基金青年項目(81202331)
【分類號】：R392
【正文快照】： 顆粒酶B(granzyme B,GZB)是絲氨酸蛋白酶家族的主要效應(yīng)分子,在顆粒酶介導(dǎo)的靶細(xì)胞凋亡機(jī)制中起核心作用,主要來源于殺傷性淋巴細(xì)胞,包括自然殺傷(natural killer,NK)細(xì)胞和細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞(cytotoxic T lymphocytes,CTL)[1]。CTL內(nèi)GZB以酶原的形式合成,經(jīng)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)加工,并將其

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本文編號：752403