本文關鍵詞：云南省部分鼠疫疫源地小腸結腸炎耶爾森菌的分離及其病原學研究

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【摘要】：目的:了解小腸結腸炎耶爾森菌在云南鼠疫疫源地中的流行、分布情況;了解所分離到的小腸結腸炎耶爾森菌的病原學特征;初步探索云南鼠疫疫源地中小腸結腸炎耶爾森菌與鼠疫耶爾森菌之間的存在關系。方法:1.樣本來源:共選取3個云南野鼠鼠疫疫源地區(qū)及2個家鼠鼠疫疫源地區(qū),采用鼠鋏法進行捕鼠,每個地區(qū)捕鼠量不少于300只;同時采集部分指示動物肛拭子。2.PCR初篩:取捕獲鼠及自斃鼠舌根及結盲腸部以及犬類肛門拭子加入到10ml改良磷酸鹽緩沖液(PBS)中,4℃冷增菌21天后,提取DNA進行foxA基因的PCR篩選。3.細菌初篩:將上述PCR陽性標本接種在CIN瓊脂平板上,經25℃,24~48h培養(yǎng)后,挑取可疑菌落對其進行foxA、ail及inv基因的菌落PCR初篩。4.生化鑒定及生物分型:上述菌落PCR陽性菌用Api 20E生化條進行鑒定。生物分型中1A型大部分為不致病菌株,故先將疑似菌落接種于膽鹽-七葉苷平板,置25℃,24h判斷結果。5.毒力相關基因檢測:對毒力基因ystA、ystB、yadA、virF及rbfc進行檢測。6.血清分型:對符合生化結果及六個毒力基因PCR結果陽性菌株用玻片凝集法對其進行O:3、O:5、O:8、O:9等四個血清分型,同時做生理鹽水凝集實驗對照。7.對致病菌株及特殊菌株進行進一步鑒定。8.對實驗結果進行統(tǒng)計分析。結果:1.云南鼠疫疫源地中小腸結腸炎耶爾森菌的分離情況云南省5個縣共計采集樣品4853份,初篩foxa陽性菌株464份,生化鑒定為小腸結腸炎耶爾森菌的菌株為266份,初篩陽性率為9.56%,分離率為5.48%。其中玉龍縣采集樣品1370份,初篩foxa陽性菌株274份,生化鑒定為小腸結腸炎耶爾森菌的菌株為164份,初篩陽性率為19.56%,分離率為11.97%;麗江古城區(qū)采集樣品782份,初篩foxa陽性菌株57份,生化鑒定為小腸結腸炎耶爾森菌的菌株為17份,初篩陽性率為7.92%,分離率為2.17%;劍川縣采集樣品1621份,初篩foxa陽性菌株116份,生化鑒定為小腸結腸炎耶爾森菌的菌株為80份,初篩陽性率為7.16%,分離率為4.94%;德宏兩縣采集樣品610份,初篩foxa陽性菌株12份,生化鑒定為小腸結腸炎耶爾森菌的菌株為1份,初篩陽性率為6.64%,分離率為0.16%;麗江犬類標本470初篩foxa陽性菌株5份,生化鑒定為小腸結腸炎耶爾森菌的菌株為4份,初篩陽性率為1.06%,分離率為0.85%。2.所得小腸結腸炎耶爾森菌中攜帶毒力基因的菌株所有樣品中攜帶毒力基因的菌株為182株菌,包含5種型別,其中(ail+、ysta-、ystb-、yada-、virf-、rbfc-)1株,(ail+、ysta-、ystb+、yada-、virf-、rbfc-)10株,(ail+、ysta+、ystb-、yada+、virf+、rbfc+)2株,(ail-、ysta-、ystb+、yada-、virf-、rbfc-)169株,(ail-、ysta-、ystb-、yada-、virf-、rbfc-)84株。3.所得小腸結腸炎耶爾森菌的生物型共包含7種生物/血清型別,其中1a/o:3型2株,3/o:3型2株,1a/o:8型4株,1a/o:9型14株,1a/o:5型6株,非生物1a血清未定型別4株,生物1a血清未定型234株。4.含致病毒力基因菌株的pfge分子分型對含有致病毒力基因的菌株進行pfge分子分型,可將該12個致病菌株分為3大類,3株麗江玉龍鼠類標本o:9血清型為一類,2株麗江玉龍犬類肛門拭子o:3血清型為第二類,3株劍川縣鼠類標本和1株麗江玉龍縣鼠類標本的o:9血清型為第三類。5.云南鼠疫疫源地中小腸結腸炎耶爾森菌的流行病學分析經spss17.0統(tǒng)計分析可得各地小腸結腸炎耶爾森菌分離率不全相同(c2=182.484,P0.001);其中麗江玉龍縣分離率高于麗江古城區(qū)(c2=62.027,P0.001);麗江玉龍縣分離率高于劍川縣(c2=49.054,P0.001);麗江玉龍縣分離率高于德宏兩縣(c2=78.286,P0.001);麗江玉龍縣分離率高于麗江犬類標本(c2=52.153,P0.001);麗江古城區(qū)分離率低于劍川縣(c2=10.383,P=0.01);麗江古城區(qū)分離率高于德宏兩縣(11.053,P=0.001);麗江古城區(qū)分離率與麗江犬類標本比較差異不具有統(tǒng)計學意義(c2=3.115,P=0.11);劍川縣分離率高于德宏兩縣(c2=29.338,P0.001);劍川縣分離率高于麗江犬類標本(c2=15.762,P0.001);德宏兩縣分離率與麗江犬類標本比較差異不具有統(tǒng)計學意義(c2=2.786,P=0.095)。結論:云南省鼠疫疫源地中廣泛存在著小腸結腸炎耶爾森菌,其中云南省野鼠型鼠疫疫源地分離率在10%左右,顯著高于云南家鼠鼠疫疫源地不足1%的分離率;云南省鼠疫疫源地中的小腸結腸炎耶爾森以生物1A型為主,包括O:3、O:5、O:8、O:9等血清型,基因型以“ail-、ystA-、ystB+、yadA-、virF-、rbfc-”為主,“ail-、ystA-、ystB-、yadA-、virF-、rbfc-”為輔。
【關鍵詞】：小腸結腸炎耶爾森菌 鼠疫疫源地 分離鑒定 病原學研究
【學位授予單位】：大理大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R378
【目錄】：

• 英文縮略詞4-5
• 中文摘要5-8
• 英文摘要8-12
• 前言12-14
• 技術路線14-15
• 材料和方法15-31
• 實驗結果31-46
• 討論46-49
• 結論49-50
• 參考文獻50-53
• 綜述53-63
• 參考文獻59-63
• 附錄63-75
• 致謝75

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本文編號：750406