本文關(guān)鍵詞：體外高通量評(píng)價(jià)過敏反應(yīng)模型的建立及其對(duì)潛在過敏原異蓮心堿的評(píng)價(jià)研究

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【摘要】：目的建立體外高通量評(píng)價(jià)過敏反應(yīng)模型,并對(duì)中藥單體化合物進(jìn)行篩選,從而確定其中的潛在過敏原。方法建立穩(wěn)定表達(dá)MrgX2的高通量藥物篩選細(xì)胞模型。首先將重組質(zhì)粒pm Cherry-C1-MrgX2轉(zhuǎn)染人胚腎HEK293細(xì)胞,通過G418篩選建立穩(wěn)定表達(dá)人MrgX2的細(xì)胞株;再通過MrgX2特異性激動(dòng)劑C48/80和拮抗劑2-APB檢測(cè)細(xì)胞株的功能和穩(wěn)定性,以Z因子確認(rèn)高通量體系的穩(wěn)定性和可靠性。采用上述模型對(duì)180個(gè)單體化合物進(jìn)行篩選,以EC_(50)、IC_(50)、特異性及毒性確定該激動(dòng)劑的功能性。結(jié)果 MrgX2細(xì)胞模型對(duì)特異性激動(dòng)劑C48/80和特異性拮抗劑2-APB的EC_(50)和IC_(50)分別為2.7μg/m L和46.29μmol/L,MrgX2細(xì)胞模型第1代和第20代對(duì)激動(dòng)劑的反應(yīng)基本一致,該模型Z因子為0.78。篩選得到異蓮心堿為陽性激動(dòng)劑,其功能驗(yàn)證結(jié)果為:EC_(50)為4.5μmol/L、IC_(50)為39.47μmol/L,只能特異性激動(dòng)MrgX2受體,且無細(xì)胞毒性。結(jié)論采用鈣流方法可成功構(gòu)建基于過表達(dá)細(xì)胞系HEK293/MrgX2的體外高通量評(píng)價(jià)過敏反應(yīng)模型,并且初步確定異蓮心堿為潛在引發(fā)過敏反應(yīng)的過敏原。
【作者單位】： 北京中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院;中國(guó)科學(xué)院北京基因組研究所;
【關(guān)鍵詞】： MrgX 過敏反應(yīng)評(píng)價(jià)方法 高通量 鈣流檢測(cè) 異蓮心堿
【基金】：北京市科技新星計(jì)劃交叉學(xué)科項(xiàng)目(xxhz201210)
【分類號(hào)】：R285.5;R-332
【正文快照】： 隨著中藥臨床應(yīng)用的日益增長(zhǎng),中藥安全性“事件”時(shí)有發(fā)生[1],尤其中藥注射劑的臨床安全性問題倍受關(guān)注[2]。目前過敏反應(yīng)評(píng)價(jià)方法分為體內(nèi)法和體外法。體內(nèi)法存在主觀性強(qiáng)、周期偏長(zhǎng)、不適合大規(guī)模藥物篩選等缺點(diǎn)[3];體外法通常具有假陽性率高、人鼠種群的差異性等缺點(diǎn)[4]。

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

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3 張帆,王嘉陵,錢家慶;異蓮心堿對(duì)麻醉大鼠血流動(dòng)力學(xué)及平滑肌收縮反應(yīng)的影響[J];中國(guó)藥理學(xué)與毒理學(xué)雜志;2000年04期

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中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 陸曙;龔少愚;張志斌;蘇偉;;異蓮心堿對(duì)高血壓大鼠左室肥厚及心肌肌漿網(wǎng)鈣泵活力的影響[A];第九次全國(guó)中醫(yī)心病學(xué)術(shù)研討會(huì)論文精選[C];2007年

2 肖軍花;丁麗麗;王嘉陵;;異蓮心堿抑制血管緊張素Ⅱ誘導(dǎo)豬冠脈平滑肌細(xì)胞增殖及機(jī)制[A];第八屆全國(guó)生化藥理學(xué)術(shù)討論會(huì)暨第七屆Servier獎(jiǎng)?lì)C獎(jiǎng)大會(huì)會(huì)議摘要集[C];2003年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

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本文編號(hào)：744660