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SCAP重組腺病毒對(duì)ATDC5細(xì)胞增殖和凋亡的影響

發(fā)布時(shí)間:2017-08-27 05:03

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【摘要】:目的構(gòu)建固醇調(diào)節(jié)元件結(jié)合蛋白裂解激活蛋白(SRREBP cleavage activating protein,SCAP)基因干擾(small interfering RNA,siRNA)和過(guò)表達(dá)重組腺病毒,觀察其對(duì)ATDC5軟骨干細(xì)胞增殖及凋亡的影響。方法應(yīng)用pAd EasyTM腺病毒載體系統(tǒng)構(gòu)建重組腺病毒質(zhì)粒p Ad-SCAPsiRNA和p AdSCAP,在HEK293細(xì)胞中分別包裝和擴(kuò)增。RT-PCR和Western blot檢測(cè)ATDC5細(xì)胞中SCAP的表達(dá),流式細(xì)胞儀檢測(cè)SCAP腺病毒對(duì)ATDC5細(xì)胞周期和凋亡的影響,Western blot檢測(cè)凋亡相關(guān)蛋白Cleaved Caspase-3、p-JNK的表達(dá)。結(jié)果成功獲腺病毒si SCAP(滴度為2.5×10~(10)PFU/m L)和Ad-SCAP(滴度為3.0×10~(11)PFU/m L)。RT-PCR和Western blot結(jié)果表明:siSCAP和Ad-SCAP能分別有效抑制和增強(qiáng)ATDC5細(xì)胞中SCAP的表達(dá)。流式細(xì)胞儀檢測(cè)結(jié)果表明:與正常組和空病毒組比較,si SCAP腺病毒處理組S期細(xì)胞比例升高15.45%和16.07%(P0.05),Ad-SCAP組比例降低14.27%和13.45%(P0.05);siSCAP組細(xì)胞凋亡率降低13.10%和11.50%(P0.05),Ad-SCAP組升高10.51%和10.17%(P0.05)。Western blot檢測(cè)結(jié)果與流式細(xì)胞儀檢測(cè)結(jié)果一致。結(jié)論成功構(gòu)建SCAP腺病毒;敲低SCAP能促進(jìn)ATDC5細(xì)胞增殖并抑制凋亡;過(guò)表達(dá)SCAP則抑制增殖、促進(jìn)凋亡。
【作者單位】: 重慶醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院細(xì)胞生物學(xué)與遺傳學(xué)教研室;
【關(guān)鍵詞】固醇調(diào)節(jié)元件結(jié)合蛋白裂解激活蛋白 重組腺病毒 ATDC細(xì)胞 細(xì)胞凋亡
【基金】:國(guó)家自然科學(xué)基金面上項(xiàng)目(81371928,81171697) 教育部新世紀(jì)優(yōu)秀人才支持計(jì)劃(NECT-12-1090)~~
【分類號(hào)】:R363
【正文快照】:

【參考文獻(xiàn)】

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2 李祥柱;張鵬;韓曉鳳;李美玲;夏飛;郭風(fēng)勁;;IRE1α重組腺病毒載體對(duì)ATDC5軟骨干細(xì)胞增殖及凋亡的影響[J];解放軍醫(yī)學(xué)雜志;2013年08期

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【相似文獻(xiàn)】

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