本文關(guān)鍵詞：降鈣素基因相關(guān)肽通過Hippo通路調(diào)控小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞成骨分化的實驗研究

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【摘要】：目的前期研究發(fā)現(xiàn)降鈣素基因相關(guān)肽(CGRP)能夠促進(jìn)成骨細(xì)胞的生物學(xué)活性,為了進(jìn)一步揭示CGRP在骨修復(fù)中的作用,檢測CGRP對小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs)成骨分化的影響,并對Hippo通路在這個過程中的作用進(jìn)行了初步探討。方法在體外誘導(dǎo)培養(yǎng)的BMSCs中加入不同濃度的CGRP,處理48 h后測試堿性磷酸酶(ALP)活性,以篩選的優(yōu)勢濃度;處理7 d后進(jìn)行茜素紅染色,分別檢測細(xì)胞的分化情況。應(yīng)用Western blot檢測CGRP作用于BMSCs后,Hippo通路核心分子Mst1/2蛋白磷酸化的表達(dá)水平;利用Hippo通路抑制劑維替泊芬(Verteporfin)阻斷下游Yap信號,逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)檢測其對成骨相關(guān)因子Ⅰ型膠原蛋白(ColⅠ)、Runt相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子2(Runx2)mRNA的表達(dá)影響。結(jié)果 ALP活性檢測結(jié)果顯示,與空白對照組相比,10~(-9)、10~(-8)、10~(-7) mol·L~(-1)濃度范圍的CGRP都能顯著促進(jìn)小鼠ALP活性的增加(P0.05),以10~(-8) mol·L~(-1)濃度的CGRP為最佳刺激濃度。用10~(-8) mol·L~(-1)濃度的CGRP處理后,茜素紅染色顯示鈣化結(jié)節(jié)明顯增多。CGRP能夠顯著上調(diào)p-Mst1/2蛋白的表達(dá)(P0.05);當(dāng)運用了抑制劑Verteporfin時,顯著降低了CGRP誘導(dǎo)的Runx2、ColⅠmRNA的表達(dá)(P0.05)。結(jié)論 CGRP能夠促進(jìn)小鼠BMSCs的成骨分化,且Hippo信號通路介導(dǎo)了CGRP作用于小鼠BMSCs成骨分化的過程。
【作者單位】： 第三軍醫(yī)大學(xué)新橋醫(yī)院口腔科;
【關(guān)鍵詞】： 降鈣素基因相關(guān)肽 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞 Hippo信號通路
【基金】：國家自然科學(xué)基金(81371110;81300873)~~
【分類號】：R329.2
【正文快照】： 降鈣素基因相關(guān)肽(calcitonin gene-related pep-tide,CGRP)在骨發(fā)育、骨代謝、骨修復(fù)以及種植體周圍的骨重建中都具有重要的病理生理學(xué)意義。本課題組在前期的實驗中發(fā)現(xiàn),CGRP能顯著促進(jìn)體外培養(yǎng)的人MG-63成骨細(xì)胞樣細(xì)胞和鼠成骨細(xì)胞的增殖和分化,并且探究了MG-63細(xì)胞蛋白質(zhì)

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本文編號：741458