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大鼠STIM1基因真核表達(dá)載體構(gòu)建及蛋白表達(dá)定位

發(fā)布時(shí)間:2017-08-25 09:14

  本文關(guān)鍵詞:大鼠STIM1基因真核表達(dá)載體構(gòu)建及蛋白表達(dá)定位


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【摘要】:[目的]構(gòu)建大鼠STIM1基因重組質(zhì)粒并在A7r5細(xì)胞中表達(dá)、定位。[方法]應(yīng)用基因合成方法獲得STIM1基因序列,克隆至攜帶EGFP標(biāo)簽的真核表達(dá)載體p EGFP-C_1、p IRES_2-EGFP,經(jīng)菌落PCR、酶切、測(cè)序鑒定后,轉(zhuǎn)染至A7r5細(xì)胞,Western Blot檢測(cè)蛋白表達(dá),激光共聚焦觀察其定位。[結(jié)果]STIM1全長(zhǎng)2 058 bp,重組載體經(jīng)酶切、PCR、測(cè)序鑒定構(gòu)建正確,在A7r5細(xì)胞內(nèi)高表達(dá),并主要定位于細(xì)胞質(zhì)。[結(jié)論]構(gòu)建大鼠STIM1基因重組質(zhì)粒并在A7r5細(xì)胞質(zhì)中表達(dá),為建立穩(wěn)定高表達(dá)細(xì)胞系及后續(xù)功能研究奠定基礎(chǔ)。
【作者單位】: 福建醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)教學(xué)中心;福建醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院生物化學(xué)與分子生物學(xué)系;
【關(guān)鍵詞】STIM 真核載體 蛋白表達(dá) Ar細(xì)胞
【基金】:福建醫(yī)科大學(xué)重大科研項(xiàng)目基金(No.09ZD010)
【分類號(hào)】:R3416
【正文快照】: 基質(zhì)交感蛋白(stromal interaction molecular,STIM)是近年研究發(fā)現(xiàn)的一種鈣庫(kù)操縱性鈣通道(store-operated Ca2+channel,SOCC)蛋白分子。STIM1是位于內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜的Ⅰ型跨膜蛋白[1],其功能作用研究范圍逐漸擴(kuò)大[2],在非興奮性細(xì)胞研究中,涉及細(xì)胞免疫應(yīng)答、神經(jīng)干細(xì)胞增殖分化、

【相似文獻(xiàn)】

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本文編號(hào):736262

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