本文關(guān)鍵詞：人血清中豬抗人淋巴免疫球蛋白雙抗體夾心ELISA檢測(cè)法的建立及驗(yàn)證

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【摘要】：目的建立人血清中豬抗人淋巴免疫球蛋白(anti-human T lymphocyte porcine immunoglobulin,ALG)雙抗體夾心ELISA檢測(cè)法,并進(jìn)行驗(yàn)證。方法以兔抗豬Ig G包被酶標(biāo)板,HRP酶標(biāo)記的鼠抗豬Ig G為二抗,建立人血清中ALG含量的雙抗體夾心ELISA檢測(cè)法,并對(duì)方法中包被濃度及二抗?jié)舛冗M(jìn)行優(yōu)化,同時(shí)驗(yàn)證該方法的重復(fù)性、敏感性、準(zhǔn)確性、特異性及穩(wěn)定性。采用優(yōu)化后的方法對(duì)14位嚴(yán)重型再生障礙性貧血(severe aplastic anemia,SAA)患者進(jìn)行ALG的血藥濃度監(jiān)測(cè)(therapeutic drug monitoring,TDM)。結(jié)果最佳包被濃度為1∶2 000,最佳二抗稀釋度為1∶8 000。參考品濃度在4.9~5 000μg/ml范圍內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)曲線的四參數(shù)Logistic曲線擬合較好,R2值為0.991 1,在4.9~156μg/ml范圍內(nèi)的線性擬合也較好,R2值為0.991 5,批內(nèi)重復(fù)性CV值均10%;其檢測(cè)底限為0.39μg/ml;濃度為500、50及5μg/ml參考品的回收率為91.2%~107.0%;該方法可特異性檢測(cè)出注射ALG患者血清中ALG含量;包被好的ELISA板及二抗、底物于4及37℃條件下分別保存1~3周及1~3 d后檢測(cè)結(jié)果均較穩(wěn)定。經(jīng)DAS 3.1.4軟件分析,14名經(jīng)ALG治療的SAA患者血清中ALG的曲線下面積(AOC)為(7.3±5.1)mg/(L·d)(95%CI),半衰期(t1/2)為(20.65±38.67)d(95%CI)。結(jié)論該方法具有良好的重復(fù)性、準(zhǔn)確度及穩(wěn)定性,可用于ALG的TDM。
【作者單位】： 武漢生物制品研究所有限責(zé)任公司免疫制劑室;
【關(guān)鍵詞】： 豬抗人淋巴免疫球蛋白 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)
【分類號(hào)】：R392
【正文快照】： 豬抗人淋巴免疫球蛋白(anti-human T lympho-cyte porcine immunoglobulin,ALG)是由人淋巴細(xì)胞免疫豬后,取血漿,經(jīng)去除雜抗體、純化、濃縮后,再經(jīng)病毒去除和滅活處理,并加入適宜穩(wěn)定劑制備而成。1975年,武漢生物制品研究所研制出第一代ALG,該產(chǎn)品已在市場上廣泛使用近40年,證

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本文編號(hào)：730619