本文關鍵詞：日本血吸蟲重組抗原rSj26的磁分離酶聯(lián)免疫分析的建立及其在低感染度血清抗體檢測中的應用

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【摘要】：目的建立基于重組日本血吸蟲抗原Sj26(rSj26)的磁分離酶聯(lián)免疫分析(rSj26-MEIA),并將其用于檢測低感染度的日本血吸蟲病患者的血清抗體。方法將重組質(zhì)粒pET28a-Sj26轉(zhuǎn)化至大腸埃希菌(Escherichia coli)BL21,用0.6 mmol/L異丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)誘導表達,表達產(chǎn)物經(jīng)鎳柱親和層析法純化后,二喹啉甲酸(BCA)法測定蛋白含量,十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)和蛋白質(zhì)印跡(Western blotting)檢測分析rSj26。將純化后的rSj26與磁珠偶聯(lián)(100μg抗原/mg磁珠),優(yōu)化反應條件,建立rSj26-MEIA方法。用rSj26-MEIA和ELISA分別檢測58份低密度感染的日本血吸蟲病患者血清、30份非血吸蟲病流行區(qū)陰性血清和6份并殖吸蟲病患者血清,并比較兩者的檢測結(jié)果。結(jié)果純化后的重組蛋白含量測定結(jié)果顯示,rSj26濃度為2.5 mg/ml。SDS-PAGE結(jié)果顯示,rSj26相對分子質(zhì)量約27 000,主要以可溶性的形式表達。Western blotting結(jié)果顯示,rSj26可被感染日本血吸蟲的兔血清和小鼠血清特異識別。rSj26-MEIA優(yōu)化反應條件結(jié)果顯示,采用rSj26-磁珠0.2 mg(含rSj26 10μg)、血清稀釋度為1∶100時,陽性血清平均吸光度(A_550值)/陰性血清平均A_550值(P/N)最大,為3.97。rSj26-MEIA和rSj26-ELISA檢測低密度感染日本血吸蟲病患者血清的結(jié)果顯示,兩者的陽性檢出率均為24.14%(14/58),兩者P/N分別為3.61和2.56;相關分析結(jié)果表明,兩者檢測的抗體A_550值間存在正相關關系(r=0.658,P0.01)。rSj26-MEIA和ELISA檢測6例并殖吸蟲病患者血清和30例非血吸蟲病流行區(qū)陰性血清,均未出現(xiàn)陽性反應。結(jié)論rSj26-MEIA可作為檢測低密度感染日本血吸蟲血清抗體的一種新技術。
【作者單位】： 武漢血液中心檢驗科;華中科技大學生命科學院;華中科技大學同濟醫(yī)學院寄生蟲學教研室;
【關鍵詞】： 日本血吸蟲 重組抗原Sj 抗體 磁分離酶聯(lián)免疫法 ELISA
【基金】：國家自然科學基金(No.81402640) 湖北省自然科學基金(No.2014CFB406) 武漢市衛(wèi)生計生委科研項目(No.WX15B23) 武漢市中青年醫(yī)學骨干人才培養(yǎng)工程(No.2014-77)~~
【分類號】：R383.24
【正文快照】： 日本血吸蟲(Schistosoma japonicum)相對分子質(zhì)量(Mr)為26 000的谷胱甘肽-S-轉(zhuǎn)移酶(Sj26GST)是WHO推薦的疫苗候選分子之一[1]。Sj26GST是血吸蟲生理功能所需的重要解毒酶,對血吸蟲的正常生理發(fā)揮著重要的作用,主要存在于血吸蟲成蟲和童蟲的實質(zhì)中[2]。重組r Sj26GST不僅具有谷

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本文編號：730302