本文關(guān)鍵詞：包涵體蛋白3種純化方法的比較

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【摘要】：目的比較3種純化方法對表達的腸道病毒71型(EV71)VP1區(qū)包涵體蛋白的純化效果。方法分別用差速離心法、固定化金屬離子親和層析(IMAC)及不同濃度飽和硫酸氨沉淀法3種包涵體蛋白純化法對原核表達EV71 VP1包涵體蛋白進行純化,蛋白垂直(SDS-PAGE)電泳檢測蛋白純化效果。結(jié)果差速離心法可以進行大批量表達蛋白純化,純化效果較好,但存在蛋白損失較多,且純化蛋白不能反復(fù)凍融的問題。IMAC柱純化獲得的蛋白純度較高,且蛋白性狀穩(wěn)定,但仍存在純化蛋白量較少的問題。飽和硫酸氨沉淀純化法無法獲得純度較高的包涵體蛋白。結(jié)論差速離心法可用于大批量蛋白純化,純化蛋白應(yīng)避免反復(fù)凍融,可小量分裝凍存后備用。IMAC柱純化可獲得純度較高且性狀相對穩(wěn)定的純化蛋白,其在相應(yīng)抗體檢測方法學(xué)的建立及疫苗制備方面均有廣泛用途。飽和硫酸氨法只適用于表達蛋白的初步濃縮純化。
【作者單位】： 解放軍第三0二醫(yī)院臨床研究管理中心;
【關(guān)鍵詞】： 包涵體蛋白 蛋白純化 蛋白垂直電泳
【基金】：國家自然科學(xué)基金資助項目(81271846)
【分類號】：R392
【正文快照】： 包涵體是外源基因在細胞中表達量過高形成的一種膜包裹的高密度、不溶性蛋白顆粒。該蛋白不具有生物學(xué)活性,其分子的空間結(jié)構(gòu)表現(xiàn)為非折疊態(tài)的聚集體,復(fù)性后可恢復(fù)其生物學(xué)活性[1]。研究發(fā)現(xiàn)外源基因低表達時很少形成包涵體,蛋白表達合成速度越快、量越高越容易形成包涵體[2-4

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本文編號：723008