本文關(guān)鍵詞：包涵體蛋白3種純化方法的比較

  更多相關(guān)文章： 包涵體蛋白 蛋白純化 蛋白垂直電泳

【摘要】：目的比較3種純化方法對(duì)表達(dá)的腸道病毒71型(EV71)VP1區(qū)包涵體蛋白的純化效果。方法分別用差速離心法、固定化金屬離子親和層析(IMAC)及不同濃度飽和硫酸氨沉淀法3種包涵體蛋白純化法對(duì)原核表達(dá)EV71 VP1包涵體蛋白進(jìn)行純化,蛋白垂直(SDS-PAGE)電泳檢測(cè)蛋白純化效果。結(jié)果差速離心法可以進(jìn)行大批量表達(dá)蛋白純化,純化效果較好,但存在蛋白損失較多,且純化蛋白不能反復(fù)凍融的問(wèn)題。IMAC柱純化獲得的蛋白純度較高,且蛋白性狀穩(wěn)定,但仍存在純化蛋白量較少的問(wèn)題。飽和硫酸氨沉淀純化法無(wú)法獲得純度較高的包涵體蛋白。結(jié)論差速離心法可用于大批量蛋白純化,純化蛋白應(yīng)避免反復(fù)凍融,可小量分裝凍存后備用。IMAC柱純化可獲得純度較高且性狀相對(duì)穩(wěn)定的純化蛋白,其在相應(yīng)抗體檢測(cè)方法學(xué)的建立及疫苗制備方面均有廣泛用途。飽和硫酸氨法只適用于表達(dá)蛋白的初步濃縮純化。
【作者單位】： 解放軍第三0二醫(yī)院臨床研究管理中心;
【關(guān)鍵詞】： 包涵體蛋白 蛋白純化 蛋白垂直電泳
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(81271846)
【分類號(hào)】：R392
【正文快照】： 包涵體是外源基因在細(xì)胞中表達(dá)量過(guò)高形成的一種膜包裹的高密度、不溶性蛋白顆粒。該蛋白不具有生物學(xué)活性,其分子的空間結(jié)構(gòu)表現(xiàn)為非折疊態(tài)的聚集體,復(fù)性后可恢復(fù)其生物學(xué)活性[1]。研究發(fā)現(xiàn)外源基因低表達(dá)時(shí)很少形成包涵體,蛋白表達(dá)合成速度越快、量越高越容易形成包涵體[2-4

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 言慧,陳曉光;包涵體的純化、復(fù)性及其在寄生蟲研究中的應(yīng)用[J];熱帶醫(yī)學(xué)雜志;2002年02期

2 張婷婷;葉波平;;包涵體蛋白質(zhì)的復(fù)性研究進(jìn)展[J];藥物生物技術(shù);2007年04期

3 張構(gòu);王菊芳;馮延葉;楊忠;馬驪;王小寧;;可溶性預(yù)測(cè)模型在包涵體復(fù)性中的應(yīng)用[J];南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2009年11期

4 楊曉梅;包涵體蛋白的復(fù)性技術(shù)[J];國(guó)外醫(yī)學(xué).臨床生物化學(xué)與檢驗(yàn)學(xué)分冊(cè);2000年02期

5 吉清,何鳳田;包涵體復(fù)性的研究進(jìn)展[J];國(guó)外醫(yī)學(xué).臨床生物化學(xué)與檢驗(yàn)學(xué)分冊(cè);2004年06期

6 陳穎;沈敏;劉寶林;;包涵體蛋白純化方法的探討[J];放射免疫學(xué)雜志;2011年01期

7 車婧,韓金祥,王世立;促進(jìn)包涵體蛋白復(fù)性的幾種有效添加劑[J];醫(yī)學(xué)分子生物學(xué)雜志;2004年02期

8 包義風(fēng);應(yīng)蓮芳;蔣琳;;包涵體蛋白復(fù)性技術(shù)研究進(jìn)展[J];微生物學(xué)免疫學(xué)進(jìn)展;2012年02期

9 田生和,全家嫵;人TRAIL細(xì)胞外段基因在大腸桿菌中的表達(dá)及其包涵體的復(fù)性[J];中國(guó)生物制品學(xué)雜志;2005年02期

10 劉建榮;趙曉瑜;步得志;李宏博;靜天玉;;重組人超氧化物歧化酶包涵體的復(fù)性和純化[J];中國(guó)醫(yī)藥工業(yè)雜志;2008年06期

中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前2條

1 王驪麗;賈佳;王菲;耿信篤;;新型二維液相色譜柱對(duì)重組人FL包涵體的復(fù)性與同時(shí)純化[A];全國(guó)生物醫(yī)藥色譜學(xué)術(shù)交流會(huì)（2010景德鎮(zhèn)）論文集[C];2010年

2 白泉;耿信篤;;蛋白折疊液相色譜及色譜餅[A];全國(guó)生物醫(yī)藥色譜及相關(guān)技術(shù)學(xué)術(shù)交流會(huì)（2012）會(huì)議手冊(cè)[C];2012年

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前8條

1 馮延葉;變性蛋白復(fù)性裝置研制及包涵體蛋白變性和復(fù)性技術(shù)研究[D];華東理工大學(xué);2013年

2 高永貴;溶菌酶和重組人干擾素-γ包涵體體外折疊復(fù)性的研究[D];浙江大學(xué);2002年

3 孔揚(yáng);重組組織型纖溶酶原激活劑變異體（RETEPLASE）工程菌的培養(yǎng)與體外復(fù)性的研究[D];山東大學(xué);2005年

4 田樹君;嗜水氣單胞菌中聚羥基脂肪酸酯包涵體蛋白PhaP的研究[D];中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué);2005年

5 王一村;阿特拉津氯水解酶定向進(jìn)化與AtGSTZ包涵體消融原因分析[D];南開大學(xué);2013年

6 楊雪瑩;不同種類除草劑的作用方式研究及ACCase CT功能域模型的建立[D];吉林大學(xué);2008年

7 常冰梅;多種基因工程體系表達(dá)人肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子的研究和評(píng)價(jià)及基因治療的實(shí)驗(yàn)初探[D];山西醫(yī)科大學(xué);2004年

8 閆繼東;rhBMP-6的表達(dá)、純化與鑒定[D];南開大學(xué);2009年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 賈佳;蛋白折疊液相色譜法復(fù)性與同時(shí)純化重組人Flt3配體的研究[D];西北大學(xué);2010年

2 張琳琳;重組蛋白包涵體變復(fù)性過(guò)程優(yōu)化及折疊機(jī)制探索[D];華東理工大學(xué);2011年

3 陳望化;重組組織型纖溶酶原激活劑變異體（RETEPLASE）復(fù)性研究[D];山東大學(xué);2006年

4 劉大和;重組人脫氧核糖核酸酶Ⅰ的復(fù)性研究[D];北京化工大學(xué);2012年

5 劉家華;蛋白折疊液相色譜法中包涵體的堿溶法[D];西北大學(xué);2006年

6 高飛;重組人干擾素α-2b包涵體蛋白的柱層析復(fù)性研究[D];安徽大學(xué);2007年

7 徐仁華;重組人干擾素α2b的純化和凍干新方法[D];吉林大學(xué);2008年

8 梁雅麗;rIGF-I的表達(dá)、純化和鑒定及MGF的克隆和表達(dá)[D];山西大學(xué);2006年

9 史秀娟;基質(zhì)金屬蛋白酶MT3-MMP的分離、純化和包涵體復(fù)性研究[D];吉林大學(xué);2004年

10 羅莉;重組sTNFR1蛋白藥物的變復(fù)性工藝研究[D];四川抗菌素工業(yè)研究所;2015年

，

本文編號(hào)：723008