本文關(guān)鍵詞：小鼠胸腺與異種抗原細胞的相互作用及其相關(guān)機制的研究

  更多相關(guān)文章： 胸腺內(nèi)注射 人肺腺癌細胞 胸腺微環(huán)境 中樞免疫耐受

【摘要】：胸腺作為中樞免疫器官,是T淋巴細胞發(fā)育成熟的主要場所,在控制自身免疫耐受中具有極為重要的作用。經(jīng)典的胸腺免疫耐受理論認(rèn)為,T細胞在發(fā)育過程中,如果遇到自身或外源性抗原,將形成對該抗原的中樞免疫耐受。這是因為,如果異種抗原進入胸腺一般會被抗原提呈細胞吞噬并加工提呈,在其細胞表面生成抗原肽-MHCⅡ類分子復(fù)合體,供發(fā)育分化過程中的T細胞識別并發(fā)生凋亡。曾有文獻報道：人為將同種異體的胰島細胞或肝細胞注入到受體胸腺中一段時間后,仍可以在受體胸腺中找到注射用胰島細胞或肝細胞,甚至在胸腺中發(fā)現(xiàn)有肝小葉結(jié)構(gòu)的生成。但在1997年時有人發(fā)現(xiàn),胸腺內(nèi)注射的同種異體抗原在受體胸腺內(nèi)的存活時間有限,而當(dāng)受體注射免疫抑制劑ALS或CsA時,才會延長供體抗原在受體胸腺內(nèi)的存活時間,證明胸腺內(nèi)有可能發(fā)生了一定的免疫應(yīng)答反應(yīng)。針對上述問題所做出的不同結(jié)果,在本實驗中我們初步探討了將異種抗原細胞A549(人肺腺癌細胞)移植于昆明鼠胸腺內(nèi)所發(fā)生的反應(yīng),及其在此過程中與胸腺組織微環(huán)境相互作用的相關(guān)機制。本實驗中我們首先采用DiI染料標(biāo)記的人肺腺癌細胞A549在小鼠胸腺內(nèi)進行微創(chuàng)注射,然后選擇不同的時間檢點對小鼠胸腺組織進行組織病理學(xué)觀察,初步研究了異種腫瘤細胞A549在小鼠胸腺內(nèi)的命運及其對胸腺微環(huán)境造成的影響；進而采用流式細胞檢測技術(shù),分析了小鼠胸腺內(nèi)注射異種抗原細胞A549后T淋巴細胞亞群的細胞數(shù)目及比例的變化與小鼠胸腺內(nèi)的免疫狀態(tài)及免疫水平。同時選用在同等條件下小鼠脾臟內(nèi)注射等量人肺腺癌細胞的方法作為對照,對比分析了異種抗原細胞A549在小鼠胸腺與脾臟內(nèi)的不同命運及可能發(fā)生的免疫機制。通過以上研究,我們初步得到以下結(jié)果：1.異種抗原細胞不能在胸腺中長期存在,會被胸腺中的免疫細胞殺傷并清除,但其清除腫瘤細胞的時間遠遠長于脾臟。2.胸腺內(nèi)注射異種抗原細胞后,CD4+T細胞與CD8+T細胞的比例上升,CD4+/CD8+T細胞的比值下降；而脾臟內(nèi)注射異種抗原細胞后,CD4+T細胞的比例上升,CD8+T細胞比例無顯著性變化,CD4+/CD8+T細胞的比值增大。3.小鼠胸腺內(nèi)異種抗原細胞的注射,會使胸腺微環(huán)境遭到破壞,包括注射時造成的機械損傷,同時腫瘤細胞的存在導(dǎo)致小鼠胸腺皮質(zhì)區(qū)面積減小,髓質(zhì)區(qū)面積增大,纖維化上皮細胞增生及細胞外基質(zhì)增多等,但隨著腫瘤細胞的凋亡及清除,胸腺微環(huán)境逐漸修復(fù)并回歸常態(tài)。4.異種抗原細胞A549的小鼠胸腺內(nèi)注射使得胸腺中T淋巴細胞各亞群的比例發(fā)生變化,其中雙陽性T淋巴細胞大量凋亡,而雙陰性及單陽性細胞的比例相對升高。通過以上結(jié)果,我們得出的結(jié)論是：1.在此實驗條件下,小鼠胸腺內(nèi)與異種抗原細胞的相互作用,會使胸腺微環(huán)境受到傷害,并對胸腺細胞的發(fā)育分化產(chǎn)生一定的影響。2.相同的異種抗原細胞,在分別移植于胸腺或脾臟均會誘導(dǎo)產(chǎn)生由淋巴細胞介導(dǎo)的排斥反應(yīng)；但發(fā)生在胸腺的免疫效應(yīng),明顯地遲于脾臟。3.研究表明：在胸腺內(nèi)成熟的淋巴細胞對異種抗原具有識別和應(yīng)答能力。本論文關(guān)于胸腺與異種抗原誘導(dǎo)的相互作用及其相關(guān)機制的研究,對全面認(rèn)識胸腺具有重要的意義,研究結(jié)果將為自身免疫耐受及器官移植或腫瘤免疫提供相應(yīng)的實驗依據(jù)。
【關(guān)鍵詞】：胸腺內(nèi)注射 人肺腺癌細胞 胸腺微環(huán)境 中樞免疫耐受
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R392
【目錄】：

• 中文摘要8-10
• ABSTRACT10-12
• 符號說明12-13
• 1 前言(包括文獻綜述)13-25
• 1.1 胸腺微環(huán)境及其功能13-15
• 1.2 T淋巴細胞的發(fā)育分化及中樞免疫耐受的形成15-20
• 1.3 胸腺內(nèi)免疫耐受現(xiàn)象的研究進展20-21
• 1.4 脾臟的結(jié)構(gòu)及功能21-23
• 1.5 異種抗原與A549細胞系23
• 1.6 本課題的研究思路及意義23-25
• 2 實驗材料與方法25-34
• 2.1 實驗材料與儀器設(shè)備25-28
• 2.1.1 實驗材料25
• 2.1.2 主要實驗試劑25-27
• 2.1.3 主要實驗儀器27-28
• 2.2 實驗方法28-34
• 2.2.1 人肺腺癌細胞A549的培養(yǎng)與Dil染色標(biāo)記28-29
• 2.2.2 小鼠胸腺及脾臟內(nèi)異種抗原細胞的移植29-30
• 2.2.3 小鼠脾臟及胸腺的組織病理學(xué)觀察30-32
• 2.2.4 流式細胞術(shù)檢測胸腺內(nèi)CD4CD8T淋巴細胞亞群比例變化32
• 2.2.5 流式細胞術(shù)檢測脾臟內(nèi)CD4CD8T淋巴細胞亞群比例變化32-33
• 2.2.6 數(shù)據(jù)分析33-34
• 3 實驗結(jié)果34-48
• 3.1 A549細胞Dil染色效果觀察34
• 3.2 小鼠胸腺內(nèi)注射人肺腺癌細胞A549后的解剖學(xué)觀察34-35
• 3.3 小鼠胸腺HE染色的組織病理學(xué)觀察35-39
• 3.4 小鼠脾臟HE染色的組織病理學(xué)觀察39-42
• 3.5 小鼠胸腺內(nèi)CD4+/CD8+T淋巴細胞亞群比例的變化情況42-43
• 3.6 小鼠脾臟內(nèi)CD4+/CD8+T淋巴細胞亞群比例的變化情況43-44
• 3.7 人肺腺癌細胞對小鼠胸腺微環(huán)境的影響44-48
• 3.7.1 小鼠胸腺微環(huán)境的組織病理學(xué)分析44-46
• 3.7.2 小鼠胸腺中T淋巴細胞亞群的變化情況46-48
• 4 討論48-52
• 4.1 人肺腺癌細胞A549在小鼠胸腺及脾臟內(nèi)的不同命運48-50
• 4.2 異種抗原細胞A549對小鼠胸腺微環(huán)境的影響50-52
• 5 論文總結(jié)與展望52-54
• 參考文獻54-61
• 致謝61-62
• 學(xué)位論文評閱及答辯情況表62

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本文編號：711060