本文關鍵詞：棉鼠SP-D基因的克隆及其在LPS誘導肺損傷模型中的表達分析

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【摘要】：目的:初步探討棉鼠肺表面活性蛋白D(surfactant-associated protein D,SP-D)核苷酸和氨基酸序列與其他物種間的同源性和交叉反應性,觀察SP-D m RNA水平和SP-D蛋白在棉鼠肺損傷模型中的表達規(guī)律,為探究呼吸道疾病發(fā)病機制提供科學的實驗依據(jù)。方法:SPF級棉鼠32只隨機分為生理鹽水對照組和脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)實驗組(實驗組再按給藥后24、48和96 h分為3個亞組,每組8只)。實驗組采用腹腔注射給予2 mg/kg的脂多糖,對照組給予相當劑量的生理鹽水。提取棉鼠肺總RNA,經(jīng)RT-PCR擴增SP-D基因并克隆測序,采用生物信息學軟件對測序結(jié)果進行同源性和系統(tǒng)進化分析;HE染色觀察各組棉鼠肺組織病理學變化;real-time PCR檢測SP-D m RNA水平;Western blot檢測SP-D蛋白表達。結(jié)果:棉鼠SP-D基因開放閱讀框含1 113 bp,編碼370個氨基酸,與部分已知其他物種SP-D核苷酸和氨基酸序列同源性分別在75.64%~90.01%和72.68%~88.56%之間;在SP-D基因構(gòu)建的系統(tǒng)進化樹上,棉鼠與其他嚙齒類動物形成一個獨特的分支;與對照組相比,實驗組肺組織病理特征性變化隨LPS刺激時間延長而加劇;SP-D m RNA水平和SP-D蛋白表達水平隨LPS處理時間的延長而逐漸增加,在LPS處理24 h后,SP-D m RNA水平和SP-D蛋白表達開始明顯增加并出現(xiàn)統(tǒng)計學差異(P0.05),48 h時后SP-D m RNA水平和SP-D蛋白表達水平均增加到峰值,96 h后兩者仍保持較高水平,與對照組相比有統(tǒng)計學差異(P0.01)。結(jié)論:棉鼠SP-D核苷酸和氨基酸序列與其他物種間具有較高同源性,且棉鼠和其他物種SP-D蛋白間存在交叉反應性;棉鼠SP-D m RNA水平和SP-D蛋白表達水平在肺損傷模型中均存在時間依賴性,可作為判斷肺損傷疾病不同發(fā)展階段的生物標記。
【作者單位】： 重慶醫(yī)科大學附屬兒童醫(yī)院兒科研究所兒童發(fā)育疾病研究教育部重點實驗室兒科學重慶市重點實驗室重慶市兒童發(fā)育重大疾病診治與預防國際科技合作基地;
【關鍵詞】： 棉鼠 肺表面活性蛋白D 克隆 表達 脂多糖
【分類號】：R-332;R56
【正文快照】： 肺表面活性蛋白D(surfactant-associated proteinD,SP-D)是由肺泡Ⅱ型上皮細胞和細支氣管上Clara細胞分泌的一種水溶性肺泡表面活性物質(zhì)。它對維持肺泡正常張力和促進氣體交換起著重要作用[1-2]。它在發(fā)揮初始免疫應答,介導先天性免疫防御以及清除凋亡細胞等方面的作用均已得

【相似文獻】

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1 席裕瑞;;在絲蟲病治療中棉鼠和沙鼠的單核吞噬細胞系活力的比較[J];國外醫(yī)學(寄生蟲病分冊);1984年05期

2 ;感染棉鼠絲蟲的大白鼠的病理變化[J];國外醫(yī)學參考資料(寄生蟲病分冊);1974年05期

3 ;[J];;年期

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本文編號：701523