棉鼠SP-D基因的克隆及其在LPS誘導(dǎo)肺損傷模型中的表達(dá)分析
發(fā)布時(shí)間:2017-08-19 15:33
本文關(guān)鍵詞:棉鼠SP-D基因的克隆及其在LPS誘導(dǎo)肺損傷模型中的表達(dá)分析
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【摘要】:目的:初步探討棉鼠肺表面活性蛋白D(surfactant-associated protein D,SP-D)核苷酸和氨基酸序列與其他物種間的同源性和交叉反應(yīng)性,觀察SP-D m RNA水平和SP-D蛋白在棉鼠肺損傷模型中的表達(dá)規(guī)律,為探究呼吸道疾病發(fā)病機(jī)制提供科學(xué)的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法:SPF級(jí)棉鼠32只隨機(jī)分為生理鹽水對(duì)照組和脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)實(shí)驗(yàn)組(實(shí)驗(yàn)組再按給藥后24、48和96 h分為3個(gè)亞組,每組8只)。實(shí)驗(yàn)組采用腹腔注射給予2 mg/kg的脂多糖,對(duì)照組給予相當(dāng)劑量的生理鹽水。提取棉鼠肺總RNA,經(jīng)RT-PCR擴(kuò)增SP-D基因并克隆測序,采用生物信息學(xué)軟件對(duì)測序結(jié)果進(jìn)行同源性和系統(tǒng)進(jìn)化分析;HE染色觀察各組棉鼠肺組織病理學(xué)變化;real-time PCR檢測SP-D m RNA水平;Western blot檢測SP-D蛋白表達(dá)。結(jié)果:棉鼠SP-D基因開放閱讀框含1 113 bp,編碼370個(gè)氨基酸,與部分已知其他物種SP-D核苷酸和氨基酸序列同源性分別在75.64%~90.01%和72.68%~88.56%之間;在SP-D基因構(gòu)建的系統(tǒng)進(jìn)化樹上,棉鼠與其他嚙齒類動(dòng)物形成一個(gè)獨(dú)特的分支;與對(duì)照組相比,實(shí)驗(yàn)組肺組織病理特征性變化隨LPS刺激時(shí)間延長而加劇;SP-D m RNA水平和SP-D蛋白表達(dá)水平隨LPS處理時(shí)間的延長而逐漸增加,在LPS處理24 h后,SP-D m RNA水平和SP-D蛋白表達(dá)開始明顯增加并出現(xiàn)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05),48 h時(shí)后SP-D m RNA水平和SP-D蛋白表達(dá)水平均增加到峰值,96 h后兩者仍保持較高水平,與對(duì)照組相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.01)。結(jié)論:棉鼠SP-D核苷酸和氨基酸序列與其他物種間具有較高同源性,且棉鼠和其他物種SP-D蛋白間存在交叉反應(yīng)性;棉鼠SP-D m RNA水平和SP-D蛋白表達(dá)水平在肺損傷模型中均存在時(shí)間依賴性,可作為判斷肺損傷疾病不同發(fā)展階段的生物標(biāo)記。
【作者單位】: 重慶醫(yī)科大學(xué)附屬兒童醫(yī)院兒科研究所兒童發(fā)育疾病研究教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室兒科學(xué)重慶市重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室重慶市兒童發(fā)育重大疾病診治與預(yù)防國際科技合作基地;
【關(guān)鍵詞】: 棉鼠 肺表面活性蛋白D 克隆 表達(dá) 脂多糖
【分類號(hào)】:R-332;R56
【正文快照】: 肺表面活性蛋白D(surfactant-associated proteinD,SP-D)是由肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞和細(xì)支氣管上Clara細(xì)胞分泌的一種水溶性肺泡表面活性物質(zhì)。它對(duì)維持肺泡正常張力和促進(jìn)氣體交換起著重要作用[1-2]。它在發(fā)揮初始免疫應(yīng)答,介導(dǎo)先天性免疫防御以及清除凋亡細(xì)胞等方面的作用均已得
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1 席裕瑞;;在絲蟲病治療中棉鼠和沙鼠的單核吞噬細(xì)胞系活力的比較[J];國外醫(yī)學(xué)(寄生蟲病分冊(cè));1984年05期
2 ;感染棉鼠絲蟲的大白鼠的病理變化[J];國外醫(yī)學(xué)參考資料(寄生蟲病分冊(cè));1974年05期
3 ;[J];;年期
,本文編號(hào):701523
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