本文關(guān)鍵詞：中試規(guī)模純化重組鼠疫rF1-V融合蛋白及其免疫原性分析

  更多相關(guān)文章： 鼠疫耶爾森菌 重組F-V融合蛋白 發(fā)酵 分離純化 免疫原性 亞單位疫苗

【摘要】：重組F1-V融合蛋白(rF1-V)是目前在進(jìn)行臨床研究的鼠疫亞單位疫苗的主要成分。本研究摸索了rF1-V的可溶表達(dá)條件,并對條件進(jìn)行了優(yōu)化和放大,確定的中試發(fā)酵工藝為:在重組菌對數(shù)生長期中期加入50μmol/LIPTG,25℃誘導(dǎo)表達(dá)5h。通過硫酸銨分級沉淀、離子交換、疏水相互作用層析和凝膠過濾四步純化,最終得到純度為99%、回收率大于20%且各項檢測指標(biāo)合格的蛋白。在此基礎(chǔ)上,將蛋白使用氫氧化鋁佐劑進(jìn)行吸附,在小鼠體內(nèi)進(jìn)行了免疫原性研究。ELISA測定兩次皮下免疫后血清的抗體滴度。比較融合蛋白免疫組(rF1-V)與單一抗原免疫組(rF1、rV)以及聯(lián)合抗原免疫組(rF1+rV)之間體液免疫反應(yīng)的差異。結(jié)果顯示:20μgrF1-V免疫劑量組誘導(dǎo)的抗F1抗體滴度明顯高于其他組,抗V抗體滴度與其他組相比沒有顯著差異。表明本工藝制備的rF1-V抗原有望作為鼠疫亞單位疫苗的主要組分。
【作者單位】： 軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院生物工程研究所;
【關(guān)鍵詞】： 鼠疫耶爾森菌 重組F-V融合蛋白 發(fā)酵 分離純化 免疫原性 亞單位疫苗
【基金】：國家傳染病重大專項(No.2013ZX10004001)資助~~
【分類號】：R392
【正文快照】： 鼠疫是由鼠疫耶爾森菌(Yersinia pestis,以下簡稱鼠疫菌)引起的自然疫源性烈性傳染病。據(jù)記載,在人類歷史上,世界范圍內(nèi)曾暴發(fā)過3次鼠疫大流行,并致使至少1.6億人死亡[1]。人間鼠疫包括腺鼠疫、肺鼠疫、敗血型鼠疫等類型,其中肺鼠疫通過氣溶膠在人與人之間傳播,在不能及時治療

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