本文關鍵詞：全人源抗IL-33scFv-IgG1Fc融合蛋白在CHO k1細胞中穩(wěn)定高表達

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【摘要】：目的利用兩種不同真核表達載體構建全人源抗白細胞介素33單鏈抗體c片段(IL-33 sc Fv-Fc)重組載體,轉染中國倉鼠卵巢(CHO)k1細胞,篩選穩(wěn)定高表達單細胞株以提高融合蛋白產量。方法雙酶切前期構建的重組質粒pc DNA3.1/SPsc Fv-Fc,回收SP-sc Fv-Fc片段,插入載體PMH3EN中,構建PMH3EN/SP-sc Fv-Fc重組載體并與重組質粒pc DNA3.1/SP-sc Fv-Fc分別轉染CHO k1細胞;反轉錄PCR、Western blot法檢測目的基因sc Fv-Fc的轉錄及表達;Dot blot法篩選穩(wěn)定高表達細胞株;ELISA檢測sc Fv-Fc的水平及生物學活性。結果重組質粒測序結果表明成功構建了真核表達載體PMH3EN/SP-sc Fv-Fc,插入目的基因SP-sc Fv-Fc大小為1560 bp左右。反轉錄PCR檢測重組質粒表達情況顯示兩組重組質粒的目的基因在CHO k1細胞中均成功轉錄。sc Fv-Fc不僅可分泌到細胞培養(yǎng)基中,還可與人IL-33以及抗人Ig G1 Fc特異性結合。重組載體PMH3EN/SP-sc Fv-Fc組融合蛋白表達水平相對較高。經過4輪篩選,選出了穩(wěn)定高表達細胞株,初步測其sc Fv-Fc表達產量為10 mg/L;競爭ELISA檢測結果顯示sc Fv-Fc可顯著抑制IL-33與其受體ST2的結合。結論在CHO k1細胞成功高表達IL-33 sc Fv-Fc。
【作者單位】： 四川醫(yī)科大學基礎醫(yī)學院;
【關鍵詞】： 白細胞介素 單鏈抗體c片段(sc Fv-Fc) CHO k細胞 表達載體
【基金】：四川省科技廳項目(2015JY0218,LY96) 四川省教育廳項目(14ZB0158)
【分類號】：R329.2
【正文快照】： 白細胞介素33(interleukin 33,IL-33)是IL-1家族成員,廣泛表達于多種組織與細胞[1],主要參與調節(jié)Th2細胞型免疫反應,與過敏性疾病、自身免疫性疾病有明顯的相關性。用IL-33抗體抑制IL-33/ST2通路,可以減輕小鼠過敏性哮喘、過敏性鼻炎以及類風濕性關節(jié)炎癥狀,抑制病情發(fā)展[2-4]，

本文編號：680049