本文關(guān)鍵詞：下丘腦LHA-ARC Orexin-A通路對(duì)胃牽張敏感神經(jīng)元放電活動(dòng)和胃運(yùn)動(dòng)調(diào)控研究

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【摘要】：目的:食欲素(orexin)是一種多功能神經(jīng)肽,主要分布于下丘腦,其在能量穩(wěn)態(tài)、獎(jiǎng)勵(lì)、成癮和睡眠/覺(jué)醒等生理功能中發(fā)揮重要作用,也被視為調(diào)節(jié)攝食行為的一個(gè)重要的調(diào)質(zhì)。本文擬通過(guò)逆行追蹤結(jié)合熒光免疫組化方法,觀察大鼠下丘腦外側(cè)核(lateral hypothalamic area,LHA)-弓狀核(Arcuate nucleus,ARC)orexin神經(jīng)和功能通路構(gòu)成,通過(guò)神經(jīng)元細(xì)胞外放電記錄和在體胃運(yùn)動(dòng),探討LHA-ARC orexin-A通路對(duì)胃?jìng)魅胄畔⒁约拔高\(yùn)動(dòng)的調(diào)控及機(jī)制。方法:本研究采用成年雄性Wistar大鼠,通過(guò)(1)采用熒光金(FG)逆行追蹤結(jié)合熒光免疫組化方法,觀察LHA-ARC orexin-A神經(jīng)通路的構(gòu)成。(2)采用細(xì)胞外放電記錄方法,鑒定ARC orexin胃牽張敏感神經(jīng)元(Gastric distention sensitive neurons,GD),并探討ARC內(nèi)orexin-A對(duì)GD神經(jīng)元放電活動(dòng)的影響及機(jī)制;采用電刺激LHA,觀察ARC內(nèi)orexin-A敏感的GD神經(jīng)元放電活動(dòng)改變,探討orexin-A在LHA-ARC通路中調(diào)控作用。(3)ARC微量注射orexin-A和及其受體阻斷劑SB334867,以及電刺激LHA,觀察大鼠胃收縮幅度和頻率的改變。結(jié)果:(1)熒光金(FG)逆行追蹤結(jié)合熒光免疫組化實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,ARC微量注射FG后1周,大鼠經(jīng)心灌注固定、腦冰凍切片,以及orexin-A免疫組化染色,在LHA可見FG/orexin雙重標(biāo)記的神經(jīng)元,提示,LHA中orexin-A神經(jīng)元可發(fā)出纖維投射至ARC。(2)大鼠ARC共記錄到149個(gè)GD神經(jīng)元,其中GD-E神經(jīng)元91個(gè),GD-I神經(jīng)元58個(gè)。ARC微量注射orexin-A,62個(gè)(62/91,68.1%)GD-E神經(jīng)元興奮性顯著增加,其放電頻率由4.27±0.58 Hz增加到8.46±0.95 Hz(P0.01);39個(gè)(39/58,67.2%)GD-I神經(jīng)元興奮性也顯著增強(qiáng),其放電頻率由4.02±0.53 Hz增加到5.43±0.57 Hz(P0.05)。然而,ARC給予大鼠orexin-A受體拮抗劑SB334867,再給予orexin-A,orexin-A興奮效應(yīng)完全被阻斷(P0.05)。(3)電刺激LHA,在ARC檢測(cè)到的62個(gè)orexin-A敏感GD-E神經(jīng)元中,有43個(gè)(43/62,69.4%)放電頻率由4.08±0.55 Hz升高至9.04±1.03 Hz,興奮顯著增強(qiáng)(P0.01);有11個(gè)(11/62,17.7%)放電活動(dòng)被抑制(2.01±0.43 Hz,P0.05),剩余8個(gè)(8/62,12.9%)神經(jīng)元放電活動(dòng)則無(wú)明顯變化(3.97±0.58 Hz,P0.05)。在記錄到的39個(gè)orexin-A敏感GD-I神經(jīng)元中,26個(gè)(26/39,66.7%)也出現(xiàn)興奮反應(yīng),放電頻率從3.87±0.51 Hz升高8.13±0.94 Hz(P0.05),有8個(gè)(8/39,20.5%)神經(jīng)元被抑制(1.95±0.37 Hz,P0.05),5個(gè)(5/39,12.8%)神經(jīng)元沒(méi)有變化(4.01±0.49Hz,P0.05)。然而ARC預(yù)先注射orexin-A受體拮抗劑SB334867,可減弱LHA電刺激對(duì)ARC orexin-A敏感的GD神經(jīng)元的興奮效應(yīng)(4.23±0.53 Hz,P0.05)。(4)胃運(yùn)動(dòng)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:在ARC注射不同濃度orexin-A,大約5 min后,大鼠胃收縮幅度和頻率呈劑量依賴性增加(P0.05~0.01)。ARC注射SB334867,可完全消除orexin-A對(duì)大鼠胃運(yùn)動(dòng)的興奮效應(yīng)(P0.05)。(5)電刺激LHA約3 min后,大鼠胃運(yùn)動(dòng)頻率和幅度開始增加,該興奮效應(yīng)大約維持15 min;ARC微量注射SB334867,可部分減弱電刺激LHA誘導(dǎo)的胃運(yùn)動(dòng)興奮效應(yīng)(P0.05)。結(jié)論:ARC orexin-A對(duì)大鼠GD神經(jīng)元和胃運(yùn)動(dòng)有調(diào)控作用,該作用可能通過(guò)調(diào)控Orexin A受體活動(dòng)實(shí)現(xiàn)的;LHA可能參與ARC Orexin-A對(duì)GD敏感神經(jīng)元和胃運(yùn)動(dòng)的調(diào)控過(guò)程。
【關(guān)鍵詞】：下丘腦外側(cè)核 弓狀核 神經(jīng)通路 胃牽張敏感神經(jīng)元 胃運(yùn)動(dòng)
【學(xué)位授予單位】：青島大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R338
【目錄】：

• 摘要2-4
• Abstract4-7
• 引言7-9
• 第1章 材料與方法9-17
• 1.1 實(shí)驗(yàn)材料9-11
• 1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物9
• 1.1.2 主要實(shí)驗(yàn)儀器9
• 1.1.3 主要實(shí)驗(yàn)試劑9-10
• 1.1.4 試劑配制10-11
• 1.2 實(shí)驗(yàn)方法11-16
• 1.2.1 熒光金逆行追蹤實(shí)驗(yàn)11-12
• 1.2.2 電生理實(shí)驗(yàn)12-14
• 1.2.3 胃運(yùn)動(dòng)實(shí)驗(yàn)14-16
• 1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析16-17
• 第2章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果17-26
• 2.1 大鼠LHA-ARC Orexin-A神經(jīng)元投射17
• 2.2 電生理實(shí)驗(yàn)結(jié)果17-21
• 2.3 胃運(yùn)動(dòng)實(shí)驗(yàn)結(jié)果21-26
• 第3章 討論26-28
• 第4章 結(jié)論28-29
• 參考文獻(xiàn)29-32
• 綜述32-54
• 綜述參考文獻(xiàn)43-54
• 攻讀學(xué)位期間研究成果54-55
• 致謝55-56

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