本文關鍵詞：人核糖核酸酶抑制因子siRNA慢病毒載體的構建及鑒定

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【摘要】：本實驗旨在構建人核糖核酸酶抑制因子穩(wěn)定干涉載體pLKO.1-ds RI,為后續(xù)觀測人核糖核酸酶抑制因子干涉載體的表達對腫瘤細胞的影響奠定基礎。用亞克隆法,將針對人核糖核酸酶抑制因子的干涉片段從Simple T-ds RI質(zhì)�？寺〉絧LK-0.1-TRC質(zhì)粒,用酶切法篩選得到陽性重組質(zhì)粒pLKO.1-ds RI,用測序法鑒定克隆序列正確。轉(zhuǎn)染時設干擾組、空載體組和空白組三組,每組三次重復。用脂質(zhì)體Cellfectin~R將pLKO.1-ds RI(干擾組)、pLKO.1-TRC(空載體組)轉(zhuǎn)染進人肝癌細胞HepG2細胞中,未處理的細胞作空白組。轉(zhuǎn)染后72hr用Western blotting檢測細胞中核糖核酸酶抑制因子表達的變化。雙酶切鑒定及測序鑒定結果均正確;Western blotting結果表明,對比空白組(1.1578±0.015)和空載體組(1.1216±0.027),干擾組RI表達(0.6119±0.048)明顯下調(diào)(P0.05)。結果表明人核糖核酸酶抑制因子干涉載體pLKO.1-ds RNH1構建成功。
【作者單位】： 大連大學醫(yī)學院;
【關鍵詞】： 人核糖核酸酶抑制因子 siRNA 慢病毒載體
【基金】：大連大學本科生創(chuàng)新課題(2015125);大連大學本科生創(chuàng)新課題
【分類號】：R3416
【正文快照】： 人核糖核酸酶抑制因子(human ribonucleaseinhibitor,h RI)是一種廣泛存在于細胞的可溶性酸性糖蛋白,分子量為50k D,能緊密結合血管形成因子(Angionenin,Ang)[1,2]。已有實驗證實,RI可能有效地抑制腫瘤誘導血管生成[3,4]。因此人們推測h RI可能為抗腫瘤血管活性的抑制基因,有

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本文編號：622482