本文關(guān)鍵詞：人核糖核酸酶抑制因子siRNA慢病毒載體的構(gòu)建及鑒定

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【摘要】：本實驗旨在構(gòu)建人核糖核酸酶抑制因子穩(wěn)定干涉載體pLKO.1-ds RI,為后續(xù)觀測人核糖核酸酶抑制因子干涉載體的表達(dá)對腫瘤細(xì)胞的影響奠定基礎(chǔ)。用亞克隆法,將針對人核糖核酸酶抑制因子的干涉片段從Simple T-ds RI質(zhì)�？寺〉絧LK-0.1-TRC質(zhì)粒,用酶切法篩選得到陽性重組質(zhì)粒pLKO.1-ds RI,用測序法鑒定克隆序列正確。轉(zhuǎn)染時設(shè)干擾組、空載體組和空白組三組,每組三次重復(fù)。用脂質(zhì)體Cellfectin~R將pLKO.1-ds RI(干擾組)、pLKO.1-TRC(空載體組)轉(zhuǎn)染進(jìn)人肝癌細(xì)胞HepG2細(xì)胞中,未處理的細(xì)胞作空白組。轉(zhuǎn)染后72hr用Western blotting檢測細(xì)胞中核糖核酸酶抑制因子表達(dá)的變化。雙酶切鑒定及測序鑒定結(jié)果均正確;Western blotting結(jié)果表明,對比空白組(1.1578±0.015)和空載體組(1.1216±0.027),干擾組RI表達(dá)(0.6119±0.048)明顯下調(diào)(P0.05)。結(jié)果表明人核糖核酸酶抑制因子干涉載體pLKO.1-ds RNH1構(gòu)建成功。
【作者單位】： 大連大學(xué)醫(yī)學(xué)院;
【關(guān)鍵詞】： 人核糖核酸酶抑制因子 siRNA 慢病毒載體
【基金】：大連大學(xué)本科生創(chuàng)新課題(2015125);大連大學(xué)本科生創(chuàng)新課題
【分類號】：R3416
【正文快照】： 人核糖核酸酶抑制因子(human ribonucleaseinhibitor,h RI)是一種廣泛存在于細(xì)胞的可溶性酸性糖蛋白,分子量為50k D,能緊密結(jié)合血管形成因子(Angionenin,Ang)[1,2]。已有實驗證實,RI可能有效地抑制腫瘤誘導(dǎo)血管生成[3,4]。因此人們推測h RI可能為抗腫瘤血管活性的抑制基因,有

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本文編號：622482