本文關(guān)鍵詞：CHIR99021對小鼠胚胎干細胞心肌細胞分化的雙重作用

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【摘要】：目的研究CHIR99021在小鼠胚胎干細胞(m ESCs)分化為心肌細胞的作用。方法運用經(jīng)典的懸滴培養(yǎng)法促進m ESCs形成擬胚體(EBs)。在不同分化時間段加入糖原合成激酶-3β(GSK-3β)抑制劑CHIR99021,誘導(dǎo)m ESCs向心肌細胞分化,相差顯微鏡在不同時間點觀察不同組EBs搏動百分率。RT-PCR法檢測心肌特異性轉(zhuǎn)錄因子Nkx2.5、α-肌球蛋白重鏈(α-MHC)基因表達水平的變化。Western blot法和免疫熒光染色法檢測心肌特異性蛋白c Tn T的表達。實驗時將不加入CHIR99021命名為對照組,分化第2~5天和第6~10天加入CHIR99021分別命名為2~5 d組和6~10 d組。結(jié)果通過懸滴培養(yǎng)法能夠形成EBs,且形成的EBs能夠出現(xiàn)自發(fā)性搏動并有c Tn T表達。在誘導(dǎo)分化的過程中,第2~5天加入CHIR99021的2~5 d組的搏動EBs百分率比對照組更高,Nkx2.5、α-MHC基因表達的水平也比對照組高;6~10 d組的結(jié)果跟2~5 d組相反。各組中都可通過Western blot和免疫熒光染色法檢測到c Tn T的表達,但2~5d組的c Tn T的表達量高于對照組,6~10 d組的c Tn T的表達量低于對照組。結(jié)論GSK-3β抑制劑CHIR99021對m ESCs心肌細胞分化具有雙重作用,即分化前期(2~5 d)促進分化,可獲得更高的分化率,分化后期(6~10 d)結(jié)果相反。
【作者單位】： 安徽醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院心血管內(nèi)科;
【關(guān)鍵詞】： 胚胎干細胞 心肌細胞 分化 GSKβ CHIR
【基金】：安徽省高等學(xué)校自然科學(xué)研究項目(編號:KJ2015ZD24)
【分類號】：R321
【正文快照】： 2016-06-27接收胚胎干細胞(embryonic stem cells,ESCs)來源于胚胎著床前的多能干細胞,在體外其可以在白血病抑制因子(leukemia inhibitory factor,LIF)/血清和小分子抑制劑CHIR99021/PD0325901(即“2i”)的條件下繼續(xù)保持增殖和分化的能力。通過體外培養(yǎng)形成擬胚體(embryoid

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本文編號：595214