本文關(guān)鍵詞：肺炎克雷伯菌KbvR調(diào)控因子對細(xì)菌生物膜與莢膜形成能力的影響

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【摘要】：目的構(gòu)建肺炎克雷伯菌LuxR家族KbvR基因缺失突變株與回補(bǔ)株,分析KbvR在肺炎克雷伯菌生長、生物膜形成及莢膜生成中的作用。方法通過自殺載體p KO3-Km質(zhì)粒構(gòu)建KbvR基因敲除株,然后擴(kuò)增出包含KbvR基因編碼區(qū)、啟動子結(jié)合區(qū)及轉(zhuǎn)錄終止區(qū)的基因片段,克隆至p GEM-T-easy質(zhì)粒上構(gòu)建KbvR基因回補(bǔ)株。繪制不同菌株生長曲線,了解KbvR對細(xì)菌生長的影響。通過結(jié)晶紫定量實驗檢測KbvR基因?qū)?xì)菌生物膜形成的影響,拉絲實驗、離心試驗及RT-PCR檢測KbvR基因?qū)?xì)菌莢膜形成的影響。結(jié)果成功獲得KbvR基因缺失突變株及回補(bǔ)株,RT-PCR結(jié)果顯示KbvR基因在缺失突變株中不表達(dá),在回補(bǔ)株中重新表達(dá)。KbvR基因不影響細(xì)菌的生長速度,基因敲除株后細(xì)菌生物膜形成及莢膜生成能力下降。體外試管靜止培養(yǎng)48 h,與野生株相比基因缺失突變株生物膜形成能力明顯下降,而KbvR基因回補(bǔ)株在液體培養(yǎng)基表面能形成明顯生物膜。結(jié)晶紫染色定量實驗發(fā)現(xiàn),基因缺失突變株生物膜形成能力顯著低于野生株(P0.01)。超粘性實驗和RT-PCR結(jié)果均顯示,KbvR基因缺失突變株莢膜形成能力明顯下降,說明KbvR基因影響肺炎克雷伯菌生物膜和莢膜的形成。結(jié)論 KbvR基因作為密度感應(yīng)系統(tǒng)LuxR孤兒調(diào)控轉(zhuǎn)錄因子,正調(diào)控肺炎克雷伯菌生物膜的形成。莢膜是細(xì)菌生物膜形成的重要因素,KbvR基因可通過影響莢膜形成而調(diào)控生物膜的形成。
【作者單位】： 湖北醫(yī)藥學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院;
【關(guān)鍵詞】： 肺炎克雷伯菌 KbvR調(diào)控子 生物膜形成 莢膜生成
【基金】：湖北省教育廳優(yōu)秀中青年科技創(chuàng)新團(tuán)隊項目(NO.T201612)
【分類號】：R378
【正文快照】： 肺炎克雷伯菌(Klebsiella pneumoniae)是一類存在于人體上呼吸道和腸道的正常菌群,可引起呼吸道、泌尿道、傷口等部位的感染[1]。目前已成為社區(qū)獲得性感染和醫(yī)院內(nèi)感染的重要病原菌之一[2-3]。肺炎克雷伯菌有極強(qiáng)的生物膜形成能力。而生物膜形成能力被證明與肺炎克雷伯菌的致

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本文編號：593529