本文關鍵詞：gas6基因修飾小鼠骨髓間充質干細胞的構建及鑒定

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【摘要】：目的:制備攜帶生長停滯特異性基因6(gas6)的慢病毒,并構建和鑒定穩(wěn)定表達生長停滯特異性蛋白6(GAS6)的小鼠骨髓間充質干細胞(MSCs)。方法:采用全骨髓貼壁法分離培養(yǎng)MSCs,用流式細胞術檢測MSCs標志分子;根據Gen Bank中小鼠gas6基因序列設計并合成上下游引物,以MSCs提取的m RNA制備的c DNA為模板擴增gas6基因片段,克隆入慢病毒表達載體,獲得Lenti-gas6-GFP-zeocin質粒并測序鑒定;采用三質粒包裝系統(tǒng)(穿梭質粒p Lenti-gas6-GZ、包裝質粒p SPAX2和p MD2.G)包裝慢病毒,并驗證其表達目的基因情況;將濃縮的慢病毒離心感染第4代MSCs,用吉歐霉素(zeocin)篩選培養(yǎng)后獲得穩(wěn)定表達GAS6的MSCs,采用流式細胞術檢測其陽性率以及表面標志分子表達情況。結果:構建了攜帶gas6基因的慢病毒,建立了gas6基因修飾的MSCs。結論:慢病毒載體可介導gas6基因在小鼠MSCs中過表達,且不會干擾MSCs的生物特性,為進一步研究gas6基因修飾的MSCs的治療作用奠定了實驗基礎。
【作者單位】： 第四軍醫(yī)大學唐都醫(yī)院傳染科;第四軍醫(yī)大學基礎部微生物學教研室;
【關鍵詞】： 生長停滯特異性基因 慢病毒載體 骨髓間充質干細胞
【基金】：十二五國家科技重大專項(2013ZX10004609)
【分類號】：R329.2
【正文快照】： 生長停滯特異性蛋白(growth arrest-specificprotein 6,GAS6)是生長停滯特異性基因6(growtharrest-specific gene 6,gas6)編碼的維生素K依賴的分泌型蛋白,由679個氨基酸殘基組成,相對分子質量為75 000。gas6是在細胞生長停滯期表達升高的一類基因,當細胞增殖周期進入G0期時,其

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1 田楓;任波;張云鳳;馬利偉;鄭振輝;;基因修飾小鼠飼養(yǎng)管理及使用過程中問題探討[J];中國比較醫(yī)學雜志;2014年07期

2 王愷龍;張帆鄭;李彬;徐邢賓;李旭麗;張帆;張瑾;;基因修飾豬技術的應用與展望[J];核農學報;2013年11期

3 王瀾;基因修飾細胞介導的腫瘤治療[J];生物技術通訊;2001年04期

4 鄭永權,彭于發(fā),趙靜,董豐收,姚建仁;基因修飾食品的幾個安全性問題[J];農業(yè)生物技術學報;2002年03期

5 章衛(wèi)平,曹雪濤,黃欣,王建莉,陶群,顧健人;基因修飾的肝細胞脾內移植后體內分布和基因表達的實驗研究[J];中國科學C輯:生命科學;1997年04期

6 嚴冬雪;呂靜;;自然人VS基因修飾人?[J];中國新聞周刊;2008年03期

7 王素;基因修飾馬鈴薯引起爭議[J];國外科技動態(tài);1999年01期

8 錢書兵,錢關祥,陳詩書;逆轉錄病毒介導γ-干擾素基因修飾人肝癌細胞的建立[J];上海第二醫(yī)科大學學報;1999年01期

9 陳吉泉,修清玉,羅文侗,何龍,章衛(wèi)平,于益芝,張明徽,顧申,曹雪濤;白細胞介素18基因修飾的樹突狀細胞的表型分析及其免疫刺激活性[J];中國腫瘤生物治療雜志;1999年02期

10 余科煒,葉曉健,馮紅,曲伸,李家順,路長林;基因修飾細胞移植治療大鼠脊髓損傷的電生理評價[J];第二軍醫(yī)大學學報;2000年07期

中國重要會議論文全文數據庫 前10條

1 葉富根;李汴生;趙秋艷;;基因修飾食品的檢測策略與方法[A];中國生物化學與分子生物學會第八屆會員代表大會暨全國學術會議論文摘要集[C];2001年

2 楊明;高長青;李力兵;;表達VEGF_(165)基因的MSCs的血管新生作用[A];中華醫(yī)學會第七次全國胸心血管外科學術會議暨2007中華醫(yī)學會胸心血管外科青年醫(yī)師論壇論文集心血管外科分冊[C];2007年

3 王利平;王健民;包曉辰;莊曉萌;程輝;宋寧霞;胡曉霞;邵宇;周虹;;可誘導共刺激分子基因修飾的骨髓間充質干細胞明顯減輕小鼠急性移植物抗宿主病[A];第12屆全國實驗血液學會議論文摘要[C];2009年

4 姚建仁;鄭永權;趙靜;董豐收;;基因修飾食品特殊安全性評價梗概[A];中國毒理學會第三屆全國學術會議論文（摘要）集[C];2001年

5 項紅兵;肖建斌;招偉賢;;基因修飾星形膠質細胞移植鎮(zhèn)痛的研究進展[A];中華醫(yī)學會疼痛學分會第七屆年會論文摘要集[C];2007年

6 連志云;周紅雨;李惠英;劉立斌;羅麗;張伶君;劉舉;趙代弟;;MICRO-DYSTROPHIN基因修飾骨髓間充質干細胞治療進行性肌營養(yǎng)不良的實驗研究[A];第十一屆全國神經病學學術會議論文匯編[C];2008年

7 張學榮;班建東;羅小玲;磨標禮;舒雨雁;;IL-2基因修飾的腫瘤細胞體內對巨噬細胞數量和功能的影響[A];廣西生物化學與分子生物學會第六次學術研討會論文摘要[C];2003年

8 張磊;莫姝;于潔;楊光;;骨髓間充質干細胞體外Fn-TPO基因修飾體系的建立[A];中華醫(yī)學會第十四次全國兒科學術會議論文匯編[C];2006年

9 李曉紅;余細勇;肖定璋;符永恒;單志新;林秋雄;鄧春玉;鄺素娟;楊敏;林曙光;;縫隙連接蛋白基因修飾BMSCs的實驗研究[A];2008第十一次全國臨床藥理學學術大會論文集[C];2008年

10 張清媛;李殿俊;王志華;張春艷;曹雪濤;葉勝龍;;B7-1基因修飾的腫瘤細胞疫苗抗腫瘤的實驗研究[A];慶祝黑龍江省免疫學會成立十周年（1993—2003）論文集[C];2003年

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1 記者 齊芳;我國科學家首次闡明維C如何精確調控基因修飾[N];光明日報;2013年

2 文苑;基因修飾食品的安全性[N];廠長經理日報;2001年

3 李杰;抗原特異TCR基因修飾T細胞技術的建立和應用[N];科技日報;2007年

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1 王偉強;IL-37b基因修飾的骨髓間充質干細胞對DSS誘導的腸炎緩解作用的研究[D];天津醫(yī)科大學;2015年

2 施鎮(zhèn)江;人β-NGF基因修飾的熒光小鼠骨髓基質細胞腦內移植治療帕金森病的實驗研究[D];昆明醫(yī)學院;2005年

3 張明;哺乳動物白細胞介素10基因修飾的骨髓樹突狀細胞前體在同種移植中的作用[D];第二軍醫(yī)大學;2002年

4 楊明;血管內皮生長因子165基因修飾后的骨髓間充質干細胞移植于缺血心肌的實驗研究[D];中國人民解放軍軍醫(yī)進修學院;2006年

5 楊俊杰;基因修飾在提高脂肪來源干細胞移植治療心梗療效和指導體內示蹤中的應用研究[D];中國人民解放軍軍醫(yī)進修學院;2012年

6 安慶祝;bFGF基因修飾的神經干細胞移植對腦出血大鼠的治療作用[D];復旦大學;2008年

7 溫茜;HGF基因修飾BMSCs治療早期股骨頭缺血性壞死的研究[D];南方醫(yī)科大學;2012年

8 蔡志堅;TGF-beta1基因修飾的骨髓未成熟樹突狀細胞來源的exosomes對小鼠炎癥性腸病的保護效果及其機制研究[D];浙江大學;2008年

9 陳春經;慢病毒載體介導胰島素樣生長因子-1基因修飾肌源性干細胞移植治療雌性壓力性尿失禁大鼠的實驗研究[D];福建醫(yī)科大學;2012年

10 邸軍;慢病毒載體介導人IL-12基因修飾樹突狀細胞體外抗肺癌作用的研究[D];吉林大學;2009年

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1 曹曉培;HGF基因修飾的間充質干細胞治療閉塞性細支氣管炎的實驗研究[D];河北北方學院;2015年

2 楊春艷;基于基因修飾的骨質疏松小鼠模型的骨微結構分形分析研究[D];南京大學;2014年

3 李濤;NGF基因修飾的BMSCs對VaD大鼠的作用[D];天津醫(yī)科大學;2009年

4 于志勇;NGF基因修飾的雪旺細胞在慢性神經損傷后修復中的作用[D];暨南大學;2010年

5 劉磊;NGF基因修飾的成纖維細胞移植修復急性脊髓損傷的試驗研究[D];首都醫(yī)科大學;2007年

6 鄭國富;慢病毒載體介導的hbFGF基因修飾骨髓間充質干細胞治療肢體缺血的實驗研究[D];福建醫(yī)科大學;2012年

7 陳解元;人前腦啡肽基因修飾的人骨髓間充質干細胞系鎮(zhèn)痛效應的研究[D];汕頭大學;2011年

8 孫瑞婷;HGF基因修飾的間充質干細胞移植干預放射性腸損的實驗研究[D];北京工業(yè)大學;2014年

9 崔潔;人肝細胞生長因子基因修飾人骨髓間充質干細胞的實驗研究[D];重慶醫(yī)科大學;2011年

10 丁英龍;IDO基因修飾的小鼠骨髓間充質干細胞誘導免疫耐受的體外實驗研究[D];蘇州大學;2012年

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