本文關(guān)鍵詞：gas6基因修飾小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的構(gòu)建及鑒定

  更多相關(guān)文章： 生長停滯特異性基因 慢病毒載體 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞

【摘要】：目的:制備攜帶生長停滯特異性基因6(gas6)的慢病毒,并構(gòu)建和鑒定穩(wěn)定表達(dá)生長停滯特異性蛋白6(GAS6)的小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(MSCs)。方法:采用全骨髓貼壁法分離培養(yǎng)MSCs,用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)MSCs標(biāo)志分子;根據(jù)Gen Bank中小鼠gas6基因序列設(shè)計(jì)并合成上下游引物,以MSCs提取的m RNA制備的c DNA為模板擴(kuò)增gas6基因片段,克隆入慢病毒表達(dá)載體,獲得Lenti-gas6-GFP-zeocin質(zhì)粒并測(cè)序鑒定;采用三質(zhì)粒包裝系統(tǒng)(穿梭質(zhì)粒p Lenti-gas6-GZ、包裝質(zhì)粒p SPAX2和p MD2.G)包裝慢病毒,并驗(yàn)證其表達(dá)目的基因情況;將濃縮的慢病毒離心感染第4代MSCs,用吉?dú)W霉素(zeocin)篩選培養(yǎng)后獲得穩(wěn)定表達(dá)GAS6的MSCs,采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)其陽性率以及表面標(biāo)志分子表達(dá)情況。結(jié)果:構(gòu)建了攜帶gas6基因的慢病毒,建立了gas6基因修飾的MSCs。結(jié)論:慢病毒載體可介導(dǎo)gas6基因在小鼠MSCs中過表達(dá),且不會(huì)干擾MSCs的生物特性,為進(jìn)一步研究gas6基因修飾的MSCs的治療作用奠定了實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
【作者單位】： 第四軍醫(yī)大學(xué)唐都醫(yī)院傳染科;第四軍醫(yī)大學(xué)基礎(chǔ)部微生物學(xué)教研室;
【關(guān)鍵詞】： 生長停滯特異性基因 慢病毒載體 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞
【基金】：十二五國家科技重大專項(xiàng)(2013ZX10004609)
【分類號(hào)】：R329.2
【正文快照】： 生長停滯特異性蛋白(growth arrest-specificprotein 6,GAS6)是生長停滯特異性基因6(growtharrest-specific gene 6,gas6)編碼的維生素K依賴的分泌型蛋白,由679個(gè)氨基酸殘基組成,相對(duì)分子質(zhì)量為75 000。gas6是在細(xì)胞生長停滯期表達(dá)升高的一類基因,當(dāng)細(xì)胞增殖周期進(jìn)入G0期時(shí),其

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