本文關(guān)鍵詞：抗人表皮生長因子受體2單克隆抗體CHO工程細(xì)胞株的構(gòu)建、篩選及表達(dá)

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【摘要】：目的構(gòu)建抗人表皮生長因子受體2(human epidermal growth factor receptor 2,HER2)人源化單克隆抗體CHO工程細(xì)胞株,并進(jìn)行篩選及表達(dá)。方法將抗HER2抗體重鏈基因Fd及輕鏈基因VL分別克隆至同一質(zhì)粒p RH上,將構(gòu)建正確的重組表達(dá)質(zhì)粒命名為p HER2。通過脂質(zhì)體法將p HER2轉(zhuǎn)染至二氫葉酸還原酶(DHFR)缺陷型CHO細(xì)胞(CHO-DG44)中,篩選穩(wěn)定表達(dá)的工程細(xì)胞株,進(jìn)行ELISA及SDS-PAGE檢測。同時(shí)對抗HER2抗體高表達(dá)細(xì)胞株進(jìn)行batch模擬試驗(yàn)。結(jié)果從近10 000株克隆中篩選獲得3株備選細(xì)胞株,命名為H6、H7和H9。細(xì)胞株培養(yǎng)上清表達(dá)的抗體僅能與重組HER2發(fā)生特異性結(jié)合;SDS-PAGE檢測結(jié)果表明,于相對分子質(zhì)量50 000和25 000處可見重鏈和輕鏈的目的蛋白條帶。H6、H7和H9細(xì)胞株在簡單的batch懸浮培養(yǎng)條件下周期約為1周,抗體水平隨培養(yǎng)時(shí)間的延長而逐漸升高,H9細(xì)胞株表達(dá)水平最高,為0.52 mg/ml。結(jié)論本研究篩選獲得的工程細(xì)胞株H9具有較高的抗HER2單克隆抗體水平,為靶向治療HER2過表達(dá)的乳腺癌和胃癌等惡性腫瘤奠定了基礎(chǔ)。
【作者單位】： 成都蓉生藥業(yè)有限責(zé)任公司科研管理部;
【關(guān)鍵詞】： 人表皮生長因子受體 單克隆抗體 中國倉鼠卵巢細(xì)胞
【分類號(hào)】：R392
【正文快照】： 人表皮生長因子受體2(human epidermal growthfactor receptor 2,HER2)蛋白作為惡性腫瘤重要標(biāo)志物之一,其過度表達(dá)在細(xì)胞的分裂、增殖、轉(zhuǎn)化、促進(jìn)腫瘤的轉(zhuǎn)移、侵襲、黏附中發(fā)揮重要作用[1-4]。HER2是具有酪氨酸激酶活性的表皮生長因子受體家族的成員之一,其過表達(dá)常見于胃癌

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中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前4條

1 時(shí)成波;徐軍;王X;賈重來;徐冬冬;盛軍;;高效表達(dá)乙型肝炎表面抗原的CHO工程細(xì)胞株的構(gòu)建[J];中國生物制品學(xué)雜志;2009年12期

2 陳琳,徐秀英,劉士輝,朱恒奇,黃培堂,黃翠芬;組織型纖溶酶原激活劑(t-PA)突變體工程細(xì)胞株生物學(xué)特性分析[J];實(shí)驗(yàn)生物學(xué)報(bào);1998年02期

3 錢莉;陸家輝;秦宏超;芮程磊;陳文艷;賈筱琴;傅奕;龔衛(wèi)娟;田芳;胡茂志;季明春;;轉(zhuǎn)基因細(xì)胞株BaF3-mb15-RAE對IKDC功能分子表達(dá)的影響[J];中國腫瘤生物治療雜志;2014年04期

4 ;[J];;年期

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本文編號(hào)：590735