本文關(guān)鍵詞：經(jīng)動(dòng)脈途徑移植骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞對(duì)慢性腎病大鼠模型腎功能影響的研究

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【摘要】：[目的]1、建立阿霉素誘導(dǎo)的慢性腎病大鼠模型,同時(shí)分離、提純、培養(yǎng)大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs)并進(jìn)行熒光標(biāo)記。2、分別通過(guò)尾靜脈途徑和腎動(dòng)脈途徑輸注標(biāo)記后的BMSCs觀察療效,并探究大鼠經(jīng)介入腎動(dòng)脈插管治療的可行性。[方法]取40只雄性SD大鼠切除左腎并通過(guò)尾靜脈以2.5mg/Kg每周一次連續(xù)兩周注射阿霉素,從而建立慢性腎病模型,同時(shí)處死大鼠后取腎臟組織行病理學(xué)檢查。于此同時(shí)取2只SD大鼠,下肢備皮消毒后取出大鼠股骨及脛骨,并從其骨髓腔內(nèi)提取BMSCs進(jìn)行分離提純培養(yǎng)后經(jīng)流式細(xì)胞學(xué)鑒定確定為目標(biāo)細(xì)胞后,傳代培養(yǎng)并去除其中的雜質(zhì)細(xì)胞和組織后取第4-6代BMSCs用攜帶綠色熒光蛋白的腺病毒轉(zhuǎn)染進(jìn)行標(biāo)記。選取造模成功的36只SD大鼠隨機(jī)分為三組,每組各12只大鼠：阿霉素慢性腎病模型對(duì)照組(ADR組)、經(jīng)腎動(dòng)脈途徑移植BMSCs組(M-A組)、經(jīng)尾靜脈移植BMSCs組(M-V組),另取12只正常SD大鼠作為空白對(duì)照組(N組)。M-A組大鼠全麻下在透視觀察下由左頸總動(dòng)脈將PE-10導(dǎo)管小心緩慢插管至腎動(dòng)脈,然后行腎動(dòng)脈造影并緩慢注入濃度為1×106個(gè)/mLBMSCs混懸液2ml, ADR組在同樣方法下經(jīng)腎動(dòng)脈注入2ml生理鹽水,M-V組大鼠經(jīng)尾靜脈注射1×106個(gè)/mL BMSCs混懸液2ml,N組大鼠經(jīng)尾靜脈注入2ml生理鹽水。檢測(cè)移植后1d、7d、14d大鼠24 h尿蛋白、血紅蛋白、血肌酐、血尿素氮、血清白蛋白改變情況,并在移植后三個(gè)時(shí)間節(jié)點(diǎn)各組分別取4只大鼠處死取腎組織行HE染色后光鏡下觀察、熒光共聚焦顯微鏡下觀察大鼠腎組織病理學(xué)改變、BMSCs在腎臟分布情況以及檢測(cè)水通道蛋白1(AQP1)及水通道蛋白2(AQP2)表達(dá)情況。[結(jié)果]造模后的大鼠24h尿蛋白顯著升高,血肌酐、尿素氮急劇上升,血清白蛋白降低表現(xiàn)為低白蛋白血癥和血紅蛋白顯著減少表現(xiàn)為明顯貧血,病理學(xué)表現(xiàn)為腎間質(zhì)片狀纖維化及大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)表現(xiàn)、腎小球局灶節(jié)段性硬化、腎小管萎縮、部分腎小管上皮細(xì)胞脫落,通過(guò)實(shí)驗(yàn)室檢查和病理學(xué)檢查共同說(shuō)明得到符合實(shí)驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)的動(dòng)物模型。分離后培養(yǎng)的BMSCs表現(xiàn)出了典型的貼壁生長(zhǎng)的特性。經(jīng)過(guò)反復(fù)傳代培養(yǎng)后得到純度很高的BMSCs,顯微鏡觀察細(xì)胞呈長(zhǎng)梭形,形態(tài)均一,旋渦狀生長(zhǎng),經(jīng)流式細(xì)胞儀鑒定,其細(xì)胞表面標(biāo)記表型抗原CD29、CD44、CD90呈高表達(dá),而CD11b、CD34低表達(dá)。BMSCs經(jīng)攜帶綠色熒光蛋白的腺病毒轉(zhuǎn)染后其綠色熒光表達(dá)率為75%,形態(tài)和正常細(xì)胞一致,無(wú)明顯改變。在經(jīng)過(guò)處理后的第7d、14d各測(cè)量時(shí)間點(diǎn)上M-A組較M-V組和ADR組血紅蛋白降低的程度減輕,貧血進(jìn)程得到緩解；M-A組和M-V組較ADR組24h尿蛋白量明顯減少、血尿素氮明顯減低,血肌酐升高的程度和趨勢(shì)降低,血清白蛋白降低的趨勢(shì)減緩,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；M-A組較M-V組在短期內(nèi)(14d以?xún)?nèi))以上各項(xiàng)指標(biāo)檢查表現(xiàn)的差異更為顯著,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；ADR組在進(jìn)行腎動(dòng)脈造影后各項(xiàng)指標(biāo)變化趨勢(shì)屬于正常波動(dòng)范圍,未引起嚴(yán)重的腎功能異常,說(shuō)明并未發(fā)生對(duì)比劑性腎病。病理學(xué)檢查提示：N組在各時(shí)間點(diǎn)病理學(xué)檢查腎組織均表現(xiàn)正常：ADR組腎小球系膜細(xì)胞和基質(zhì)不同程度增生,腎小球出現(xiàn)局灶節(jié)段性硬化,腎間質(zhì)有片狀纖維化及大量炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)；M-V組腎小球系膜細(xì)胞和基質(zhì)增生程度較輕,腎間質(zhì)可見(jiàn)局灶狀纖維化及少量炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)；M-A組腎小球毛細(xì)血管襻擴(kuò)張,腎小管無(wú)明顯萎縮,腎間質(zhì)纖維化不明顯,炎性反應(yīng)輕。熒光共聚焦顯微鏡提示：N組及ADR組在各時(shí)間點(diǎn)均無(wú)明顯綠色熒光顯示,M-V組和M-A組在移植后第1天均觀察到綠色熒光顯示,且逐漸增強(qiáng),第14天時(shí)最強(qiáng)。M-V組綠色熒光僅分布在腎小管,而M-A組綠色熒光主要分布在腎小管,同時(shí)在腎小球系膜區(qū)可見(jiàn)少量分布。ADR組中AQP1及AQP2平均光密度數(shù)值明顯升高,提示AQP1、AQP2過(guò)度表達(dá)；而M-A組和M-V組中AQP1及AQP2表達(dá)較ADR組明顯下調(diào),并且M-A組下調(diào)更為顯著,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,通過(guò)調(diào)節(jié)AQP1及AQP2的表達(dá),進(jìn)而維持了部分腎臟對(duì)水鈉平衡及滲透壓的調(diào)節(jié),保護(hù)了腎功能。[結(jié)論]1、切除一側(cè)腎以阿霉素誘導(dǎo)慢性腎臟病大鼠制作模型可行,并能減少造模時(shí)間及阿霉素用量,是安全、有效、可重復(fù)性強(qiáng)的一種穩(wěn)定建造慢性腎病大鼠模型的方法。2、大鼠BMSCs易于取材,容易分離提純培養(yǎng),并能得到純度高的細(xì)胞,同時(shí)鑒定方法簡(jiǎn)便,綠色熒光標(biāo)記簡(jiǎn)單、可靠、發(fā)光穩(wěn)定。3、移植BMSCs治療阿霉素慢性腎病模型大鼠具有良好療效,能在短期內(nèi)能通過(guò)減少尿蛋白、減緩血清白蛋白、血紅蛋白下降趨勢(shì)、減慢血肌酐升高趨勢(shì)、減少尿素氮、緩解貧血加重程度、下調(diào)AQP 1及AQP2表達(dá)進(jìn)而維持部分水鈉平衡,從而起到保護(hù)和改善腎功能的效果。通過(guò)病理學(xué)和熒光共聚焦顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn)BMSCs主要分布在腎小管區(qū)域并能改善腎小管功能。觀察通過(guò)介入方式在無(wú)菌的條件下經(jīng)左頸總動(dòng)脈插管至腎動(dòng)脈是一種可行的間接腎動(dòng)脈插管方法,并且經(jīng)腎動(dòng)脈移植BMSCs能夠取得更好的療效,是安全可靠的方法。
【關(guān)鍵詞】：阿霉素 慢性腎病 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞 介入
【學(xué)位授予單位】：昆明醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：R692;R-332
【目錄】：

• 縮略詞表(以字母順序排列)5-6
• 中文摘要6-9
• 英文摘要9-12
• 前言12-17
• 材料與方法17-22
• 結(jié)果22-33
• 討論33-38
• 結(jié)論38-39
• 參考文獻(xiàn)39-42
• 綜述42-49
• 參考文獻(xiàn)47-49
• 攻讀學(xué)位期間獲得的學(xué)術(shù)成果49-50
• 致謝50

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本文編號(hào)：586602