本文關鍵詞：重組卡介苗-BE1726D的鑒定及其免疫原性評價

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【摘要】：目的鑒定重組卡介苗-BE1726D(rBCG-BE1726D)特異性蛋白的表達,并評價其在小鼠體內的免疫原性。方法將凍干的菌株BCG-SSI和rBCG-BE1726D擴大培養(yǎng)后,超濾濃縮收集上清,超聲破碎離心后收獲菌體,Western blot法進行特異性蛋白檢測。用rBCG-BE1726D和BCG-SSI菌株經腹股溝皮下免疫BALB/c小鼠6周后,分離小鼠脾淋巴細胞,ELISPOT及ELISA法檢測脾淋巴細胞干擾素γ(interferonγ,IFNγ)的分泌水平;流式細胞術檢測小鼠脾淋巴細胞CD4~+和CD8~+ T細胞的比例。結果菌株rBCG-BE1726D中存在Ag85B、ESAT-6、RV2626c蛋白;菌株BCGSSI中僅存在Ag85B蛋白。經Ag85B刺激后,BCG-SSI組和rBCG-BE1726D組產生的細胞斑點數(shù)均明顯高于PBST對照組(P0.05);經PPD刺激后,rBCG-BE1726D組產生細胞斑點數(shù)量顯著高于BCG-SSI組和PBST對照組(P0.000 1);各組間ESAT-6、Rv2626c、Rv1733c、RpfD刺激所產生的細胞斑點數(shù)差異無統(tǒng)計學意義(P0.05)。經Ag85B刺激后,BCG-SSI組和rBCG-BE1726D組產生IFNγ的水平顯著高于PBST對照組(P0.05);經PPD刺激后,rBCG-BE1726D組的IFNγ分泌水平與BCG-SSI組差異無統(tǒng)計學意義(P0.05);各組間ESAT-6、Rv1733c、Rv2626c、RpfD刺激產生的IFNγ分泌水平差異無統(tǒng)計學意義(P0.05)。rBCG-BE1726D組CD4~+、CD8~+細胞總比例及CD4~+ T/CD8~+ T比值明顯低于BCG-SSI組和PBST對照組(P0.05),CD8~+ T細胞比例明顯高于BCG-SSI組和PBST對照組(P0.05)。結論 rBCG-BE1726D有較強的免疫原性,可明顯提高BALB/c小鼠的免疫應答水平,但與BCG-SSI比較,其免疫原性無明顯優(yōu)勢,需對疫苗的保護力進行進一步研究。
【作者單位】： 武漢生物制品研究所有限責任公司;
【關鍵詞】： 重組卡介苗-BED 免疫原性 結核分枝桿菌
【基金】：武漢市國際科技合作項目(2013030409020107)
【分類號】：R392
【正文快照】： 結核病(tubeculosis,TB)已成為威脅人類健康的主要疾病之一,隨著結核桿菌抗藥性的出現(xiàn)及艾滋病聯(lián)合感染的影響,結核病發(fā)病率呈每年上升趨勢。目前,全球用于預防結核病的唯一疫苗是牛結核分枝桿菌卡介苗(Bacillus Calmette-Guerin,BCG),其在兒童抵抗結核桿菌方面發(fā)揮了較好的作

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