本文關(guān)鍵詞：小鼠resistin基因慢病毒表達(dá)載體構(gòu)建及在KMB17細(xì)胞中的表達(dá)

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【摘要】：[目的]構(gòu)建攜帶小鼠resistin基因的慢病毒表達(dá)載體,并高效轉(zhuǎn)導(dǎo)靶細(xì)胞。[方法]從小鼠脂肪組織提取總RNA,經(jīng)PCR擴(kuò)增、酶切、連接、轉(zhuǎn)化后構(gòu)建重組質(zhì)粒;通過(guò)293T細(xì)胞包裝為重組慢病毒顆粒,然后感染KMB17細(xì)胞,檢測(cè)小鼠resistin基因在靶細(xì)胞中的表達(dá)。[結(jié)果]PCR擴(kuò)增到預(yù)期的342 bp大小的resistin基因目的片段;構(gòu)建的重組質(zhì)粒經(jīng)酶切得到了342 bp大小的目的片段,測(cè)序鑒定為小鼠resistin基因序列;重組慢病毒包裝可觀察到很強(qiáng)的綠色熒光,說(shuō)明具有較高的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染效率;重組慢病毒感染KMB17后可檢測(cè)到小鼠resistin基因轉(zhuǎn)錄水平和蛋白水平的表達(dá),證明resistin基因得到有效轉(zhuǎn)導(dǎo)并可在靶細(xì)胞中高水平表達(dá)。[結(jié)論]成功構(gòu)建了攜帶小鼠resistin基因的慢病毒表達(dá)載體并可在KMB17靶細(xì)胞中獲得高效表達(dá)。
【作者單位】： 中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院醫(yī)學(xué)生物學(xué)研究所中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院醫(yī)學(xué)靈長(zhǎng)類動(dòng)物研究中心云南省重大傳染病疫苗研發(fā)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;
【關(guān)鍵詞】： resistin 慢病毒載體 靶細(xì)胞 表達(dá) 小鼠
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金面上項(xiàng)目(“c AMP信號(hào)通路介導(dǎo)的FGF21對(duì)T2DM糖脂代謝的調(diào)控機(jī)制研究”,No.81570749) 云南省應(yīng)用基礎(chǔ)研究面上項(xiàng)目(“FGF21和INS對(duì)1型糖尿病的聯(lián)合基因治療研究”,No.2013FB089) 協(xié)和青年基金和中央高�；究蒲袠I(yè)務(wù)費(fèi)專項(xiàng)(“恒河猴resistin剪接體的發(fā)現(xiàn)及其對(duì)胰島素敏感性的調(diào)節(jié)作用與分子機(jī)制”,No.33320140083)
【分類號(hào)】：R3416
【正文快照】： 胰島素抵抗是2型糖尿病(type 2 diabetes melli-tus,T2DM)發(fā)病的重要因素,在T2DM的發(fā)病過(guò)程中胰島素抵抗的作用較為突出,致使整個(gè)機(jī)體胰島素分泌相對(duì)不足進(jìn)而使組織和細(xì)胞的胰島素敏感性降低[1]。大量研究表明,脂肪組織體積增大并使各種各樣的脂肪細(xì)胞因子的表達(dá)發(fā)生變化,例如

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 周詠明;張木勛;郭偉;余美霞;薛克營(yíng);黃士昂;陳艷紅;朱歡麗;許莉軍;郭鐵成;;Expression of Resistin Protein in Normal Human Subcutaneous Adipose Tissue and Pregnant Women Subcutaneous Adipose Tissue and Placenta[J];華中科技大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)英德文版);2006年03期

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9 趙明輝;張春明;王彥;王德芝;韓佩珍;;抗Resistin合成多肽抗體的制備和鑒定[A];第七屆全軍防原醫(yī)學(xué)專業(yè)委員會(huì)第五屆中國(guó)毒理學(xué)會(huì)放射毒理專業(yè)委員會(huì)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2004年

10 許定堯;陳會(huì)敏;趙京楊;曾翠平;徐在言;吳健;伍曉雄;戴漢川;;豬脂肪細(xì)胞因子Resistin基因的克隆及高效表達(dá)條件的優(yōu)化[A];全國(guó)動(dòng)物生理生化第十次學(xué)術(shù)交流會(huì)論文摘要匯編[C];2008年

中國(guó)重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

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中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前5條

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3 李雅慧;Resistin蛋白在胰島素抗性形成中的分子生物學(xué)機(jī)制[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2004年

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5 張健;Resistin對(duì)炎癥信號(hào)途徑的調(diào)控研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2010年

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本文編號(hào)：577428