本文關(guān)鍵詞：日本血吸蟲分泌蛋白和外膜蛋白的原核表達(dá)與鑒定

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【摘要】：目的原核表達(dá)和鑒定含有編碼日本血吸蟲分泌蛋白、外膜蛋白基因的重組質(zhì)粒,為高通量篩選日本血吸蟲病疫苗或診斷抗原奠定基礎(chǔ)。方法將前期構(gòu)建的28個(gè)含有分泌蛋白、外膜蛋白編碼基因序列的p ET32(+)重組質(zhì)粒通過化學(xué)法轉(zhuǎn)到大腸桿菌(E.coli)BL21(DE3)菌株中進(jìn)行培養(yǎng),加入異丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)。對(duì)誘導(dǎo)表達(dá)后的細(xì)菌進(jìn)行超聲破壁,以12%SDS-PAGE分別對(duì)菌液、上清及沉淀進(jìn)行檢測,判斷目的蛋白的大小和表達(dá)分布情況。利用蛋白芯片結(jié)合抗His標(biāo)簽熒光抗體對(duì)重組融合蛋白表達(dá)情況做進(jìn)一步鑒定。結(jié)果在IPTG終濃度0.1 mmol/L、37℃、200 r/min和4 h的誘導(dǎo)條件下,含有編碼分泌蛋白、外膜蛋白序列的重組質(zhì)粒能夠在E.coli BL21(DE3)中高效表達(dá)。SDS-PAGE顯示28個(gè)融合蛋白具有不同程度的表達(dá),其中2個(gè)分布在上清中,26個(gè)分布在沉淀中,條帶大小與預(yù)測大小一致。蛋白芯片成功檢測到His抗體熒光信號(hào),進(jìn)一步證實(shí)了目的蛋白的表達(dá)情況。結(jié)論利用E.coli成功表達(dá)了一批編碼日本血吸蟲分泌蛋白、外膜蛋白的融合蛋白,為后續(xù)疫苗和免疫診斷研究奠定了基礎(chǔ)。
【作者單位】： 湖北醫(yī)藥學(xué)院;湖北省血吸蟲病防治研究所;江蘇省血吸蟲病防治研究所;
【關(guān)鍵詞】： 日本血吸蟲 分泌蛋白 外膜蛋白 原核表達(dá) 蛋白芯片
【基金】：湖北省衛(wèi)生計(jì)生血防專項(xiàng)(WJ2015XB032)
【分類號(hào)】：R383.24
【正文快照】： 日本血吸蟲病是由日本血吸蟲引起的、嚴(yán)重危害我國人民身心健康和阻礙社會(huì)經(jīng)濟(jì)發(fā)展的人獸共患寄生蟲病,同時(shí)也是一種免疫性疾病[1]。我國自20世紀(jì)50年代開展血吸蟲病防治工作以來,已取得了巨大成就,但截至2014年底,全國仍有推算血吸蟲病患者115 614例[2]。近年來,日本血吸蟲基

【相似文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：571103