本文關(guān)鍵詞：腺相關(guān)病毒介導(dǎo)的狨猴P53基因沉默

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【摘要】：目的在細(xì)胞和整體動(dòng)物水平,利用RNA干擾技術(shù)下調(diào)絨猴p53基因表達(dá)。方法對(duì)狨猴p53基因做生物信息學(xué)分析,針對(duì)靶序列設(shè)計(jì)shRNA干擾序列,構(gòu)建在腺相關(guān)病毒載體上,轉(zhuǎn)染非洲綠猴腎細(xì)胞(cos-7),在細(xì)胞水平用熒光定量PCR檢測(cè)p53mRNA抑制效果,以Western blot方法檢測(cè)p53蛋白水平表達(dá)變化;優(yōu)選shRNA干擾序列,包裝含shRNA干擾序列的8型腺相關(guān)病毒,靜脈注射感染狨猴;手術(shù)取少量肝臟組織,用Western blot和免疫組化方法檢測(cè)p53蛋白水平的變化。結(jié)果細(xì)胞水平研究發(fā)現(xiàn)2個(gè)有效RNA干擾靶點(diǎn),mRNA干擾效率分別為(82.7±8.1)%和(80.7±7.5)%(P0.05);蛋白表達(dá)下調(diào)(77.3±11.5)%和(73.7±10.7)%(P0.05);2只絨猴感染病毒后,經(jīng)活體熒光成像分析可見病毒在肝臟、睪丸、頸部等位置分布,狨猴肝臟P53蛋白經(jīng)Western blot、免疫組化分析未見明顯變化。結(jié)論本研究在細(xì)胞水平實(shí)現(xiàn)絨猴P53基因表達(dá)下調(diào),但整體動(dòng)物水平狨猴肝臟P53蛋白表達(dá)未發(fā)現(xiàn)明顯變化;今后需在感染方式等方面做進(jìn)一步優(yōu)化。
【作者單位】： 中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究所;北京大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院;
【關(guān)鍵詞】： AAV P RNA干擾 狨猴
【基金】：國(guó)家科技支撐計(jì)劃(No.2014BAI03B01)
【分類號(hào)】：R373
【正文快照】： 。RNAi技術(shù)可以特異性剔除或關(guān)閉特定基因的表達(dá),廣泛應(yīng)用于基因功能研究與基因治療領(lǐng)域。利用RNAi的方法已經(jīng)成功在嚙齒類動(dòng)物的受精卵中下調(diào)基因的表達(dá),建立相關(guān)的動(dòng)物模型[1],但是在狨猴上還沒有相應(yīng)研究。腺相關(guān)病毒(adeno-associated virus,AAV)是一種重要的基因載體,主

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本文編號(hào)：560485