本文關(guān)鍵詞：風(fēng)疹病毒多表位診斷抗原的制備與評(píng)價(jià)

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【摘要】：原核表達(dá)與層析純化獲取風(fēng)疹病毒(Rubella Virus,RV)多表位診斷抗原,并初步評(píng)價(jià)其抗原性。將RV衣殼蛋白C aa 3~29、aa 96~123以及包膜糖蛋白E1aa208~247三個(gè)主要免疫顯性表位串聯(lián),密碼子優(yōu)化后全基因合成;利用基因重組技術(shù)將多表位串聯(lián)片段插入帶有GST標(biāo)簽的表達(dá)質(zhì)粒中,在大腸桿菌中進(jìn)行表達(dá),并利用親和層析和離子交換層析純化目的蛋白;利用Western Blot(WB)技術(shù)對(duì)目的蛋白抗原性進(jìn)行鑒定,并建立RV-IgM抗體檢測(cè)ELISA技術(shù),初步評(píng)價(jià)此方法對(duì)陰陽(yáng)血清樣本的鑒別能力。獲取高度均質(zhì)的RV多表位診斷抗原,WB實(shí)驗(yàn)表明目的蛋白不但可以被anti-GST單克隆抗體識(shí)別,還可以被anti-RV多克隆抗體、RV-IgM陽(yáng)性血清相應(yīng)抗體所識(shí)別。分別對(duì)48份RV急性感染病例的陽(yáng)性血清、陰性血清和健康人血清進(jìn)行檢測(cè),發(fā)現(xiàn)一致性優(yōu)異。原核表達(dá)與層析純化可以獲取抗原性良好的RV多表位診斷抗原,偶聯(lián)HRP后可以作為檢測(cè)抗原應(yīng)用于RV-IgM ELISA血清學(xué)檢測(cè)中。
【作者單位】： 中國(guó)疾病預(yù)防控制中心病毒病預(yù)防控制所;北京出入境檢驗(yàn)檢疫技術(shù)中心;
【關(guān)鍵詞】： 多表位抗原 風(fēng)疹病毒 原核表達(dá) 層析純化 GST標(biāo)簽
【分類號(hào)】：R392;R373.11
【正文快照】： 2.北京出入境檢驗(yàn)檢疫技術(shù)中心,北京100026)風(fēng)疹病毒(Rubella virus,RV)是風(fēng)疹的病原體,屬于披膜病毒科風(fēng)疹病毒屬,為有包膜正義單鏈RNA病毒,人是唯一宿主。RV只有一個(gè)血清型,但有多個(gè)基因型,目前共有12個(gè)被認(rèn)可的基因型(1B,1C,1D,1E,1F,1G,1H,1I,1J,2A,2B,2C)和一個(gè)臨時(shí)基因

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