本文關(guān)鍵詞：BMP-4對大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞與神經(jīng)干細(xì)胞共培養(yǎng)轉(zhuǎn)歸影響的實驗研究

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【摘要】：目的探索骨形態(tài)生發(fā)蛋白4(BMP-4)對經(jīng)過與大鼠骨髓間充干細(xì)胞(MSCs)共同培養(yǎng)后的大鼠神經(jīng)干細(xì)胞(NSCs)的分化和存活的影響,為細(xì)胞移植治療脊髓損傷提供進(jìn)一步的理論依據(jù)。方法提取新生24小時以內(nèi)SD大鼠的幼鼠的大腦組織,采用無血清培養(yǎng)基培養(yǎng)7天,與從SD大鼠股骨骨髓中提取并經(jīng)貼壁梯度培養(yǎng)后的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞建立MSCs與NSCs共培養(yǎng)模型,在共同培養(yǎng)體系中加入BMP-4,利用流式細(xì)胞儀檢測經(jīng)Annexin V凋亡試劑盒處理后NSCs的存活率,使用細(xì)胞免疫熒光染色技術(shù)對分化后的NSCs進(jìn)行免疫熒光染色并統(tǒng)計NSCs分化后的特異性蛋白MBP表達(dá)陽性的少突膠質(zhì)細(xì)胞、神經(jīng)元特異性蛋白MAP-2及特異性蛋白GFAP表達(dá)陽性的星形膠質(zhì)細(xì)胞的表達(dá)情況。然后提取分化后細(xì)胞的總蛋白,行Western blot免疫印跡法鑒定NSCs分化后的少突膠質(zhì)細(xì)胞特異性蛋白MBP、星形膠質(zhì)細(xì)胞GFAP及神經(jīng)元特異性蛋白MAP-2的表達(dá)情況,計算NSCs的存活率和分化率,進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析后明確BMP-4對共培養(yǎng)后NSCs的存活及分化的影響。結(jié)果(1)原代培養(yǎng)三代后的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞可見貼壁細(xì)胞呈梭形、螺旋狀,形態(tài)大體一致,原代培養(yǎng)的神經(jīng)干細(xì)胞可見大量懸浮生長的神經(jīng)干細(xì)胞球,經(jīng)過共同培養(yǎng)后神經(jīng)干細(xì)胞可定向分化為少突膠質(zhì)細(xì)胞、星形膠質(zhì)細(xì)胞及神經(jīng)元細(xì)胞。(2)利用H2O2制作細(xì)胞凋亡模型,將共培養(yǎng)后的神經(jīng)干細(xì)胞分為4組分別為空白對照組、H2O2組、H2O2+共培養(yǎng)組及H2O2+共培養(yǎng)+BMP-4組。各組均采用Annexin V-PI細(xì)胞凋亡試劑盒,利用流式細(xì)胞術(shù)測定誘導(dǎo)凋亡后的神經(jīng)干細(xì)胞的存活率。經(jīng)流式細(xì)胞術(shù)檢測分析可見共培養(yǎng)后的神經(jīng)干細(xì)胞存活率明顯提高,但在共培養(yǎng)體系中加入BMP-4后細(xì)胞存活率出現(xiàn)一定程度的下降,經(jīng)方差分析顯示,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(F=29.373,P0.05)(3)BMSCs與NSCs共培養(yǎng)后分為兩組即空白對照組和BMP-4組,培養(yǎng)7天后可見細(xì)胞形態(tài)上已出現(xiàn)了明顯的分化,光鏡下觀察發(fā)現(xiàn)示細(xì)胞球向周邊呈放射狀生長,細(xì)胞間交織緊密,細(xì)胞間隙較窄。細(xì)胞免疫熒光染色可見GFAP陽性的星形膠質(zhì)細(xì)胞、MAP-2表達(dá)陽性的神經(jīng)元細(xì)胞以及MBP表達(dá)陽性的少突膠質(zhì)細(xì)胞(4)提取細(xì)胞分化后的總蛋白,測定蛋白濃度后確定WB的上樣量測定神經(jīng)干細(xì)胞分化后GFAP、MAP-2、MBP的表達(dá)量,統(tǒng)計數(shù)據(jù)發(fā)現(xiàn)實驗組中GFAP的表達(dá)量高于對照組(t=9.638,P0.05),MBP的表達(dá)量明顯低于對照組(t=4.902,P0.05),MAP-2的表達(dá)無明顯差異不具有統(tǒng)計學(xué)意義(t=0.71,P0.05)。結(jié)論BMP-4阻礙了MSCs促進(jìn)NSCs的有效分化的效應(yīng)。
【關(guān)鍵詞】：共培養(yǎng) 骨形態(tài)發(fā)生蛋白 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞 分化 神經(jīng)干細(xì)胞 存活
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R651.2
【目錄】：

• 中英文詞匯對照表5-6
• 摘要6-8
• 英文摘要8-10
• 引言10-12
• 材料與方法12-22
• 結(jié)果22-30
• 討論30-33
• 結(jié)論33-34
• 參考文獻(xiàn)34-38
• 附錄38-39
• 致謝39-40
• 綜述40-49
• 參考文獻(xiàn)46-49

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