發(fā)布時(shí)間：2017-07-17 01:05

  本文關(guān)鍵詞：腦膜炎球菌表面蛋白fHBP與PorA的融合表達(dá)及其免疫原性

  更多相關(guān)文章： 腦膜炎球菌 fHBP蛋白 PorA蛋白 融合表達(dá) 免疫原性

【摘要】：目的構(gòu)建腦膜炎球菌(Neisseria meningitidis,Nm)表面蛋白fHBP重組表達(dá)質(zhì)粒,并與PorA蛋白融合表達(dá),對(duì)單抗原fHBP和融合抗原fHBP-PorA的免疫原性進(jìn)行檢測(cè)。方法篩選并優(yōu)化fHBP和PorA基因序列,設(shè)計(jì)連接片段將PorA連接至fHBPC-端,構(gòu)建重組表達(dá)質(zhì)粒pET-24b-fHBP和pET-24b-fHBP-PorA,分別轉(zhuǎn)化E.coli BL21(DE3)感受態(tài)細(xì)胞,IPTG誘導(dǎo)表達(dá)。表達(dá)的重組蛋白經(jīng)鎳柱親和層析和凝膠過(guò)濾層析后免疫家兔,制備抗血清,采用間接ELISA、流式細(xì)胞術(shù)和微量血清殺菌力試驗(yàn)(serum bactericidal assay,SBA)評(píng)價(jià)抗原的免疫原性。結(jié)果經(jīng)雙酶切和測(cè)序鑒定,兩個(gè)蛋白的重組表達(dá)質(zhì)粒構(gòu)建正確。重組蛋白fHBP以可溶形式表達(dá),fHBP-PorA以包涵體形式表達(dá),純化后純度均在90%以上�？寡宓味染�1.0×10~5以上。流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)顯示,抗血清與Nm可發(fā)生特異性結(jié)合,且fHBP-Por A抗血清顯示出一定的交叉反應(yīng)。fHBP和fHBP-PorA抗血清對(duì)Nm29019的殺菌滴度為1∶128。結(jié)論 fHBP具有較好的抗原性和免疫原性,具備B群腦膜炎疫苗開(kāi)發(fā)前景。多抗原融合策略需更多的優(yōu)化考慮。
【作者單位】： 上海生物制品研究所有限責(zé)任公司第三研究室;
【關(guān)鍵詞】： 腦膜炎球菌 fHBP蛋白 PorA蛋白 融合表達(dá) 免疫原性
【分類號(hào)】：R378.15
【正文快照】： 腦膜炎球菌(Neisseria meningitidis,Nm)感染可導(dǎo)致流行性腦脊髓膜炎和敗血癥。莢膜多糖及多糖結(jié)合疫苗能有效控制A、C、W135和Y群Nm感染,而對(duì)B群Nm(Men B)感染的預(yù)防,只有外膜囊泡疫苗(outer membrane vesicle,OMV)在局部地區(qū)獲得成功[1]。OMV疫苗的主要保護(hù)性抗原組分是I類

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本文編號(hào)：551287