發(fā)布時間：2017-07-14 12:35

  本文關(guān)鍵詞：漢灘病毒糖基化位點全突變重組假病毒的制備及鑒定

  更多相關(guān)文章： 漢灘病毒 包膜糖蛋白 糖基化位點全突變體 重組假病毒

【摘要】：目的構(gòu)建漢灘病毒(HTNV)包膜糖蛋白(GP)糖基化位點全突變重組假病毒。方法應(yīng)用一次性多位點突變技術(shù)同時突變HTNV GP上5個N-糖基化位點(Gn的N134、N235、N347、N399和Gc的N928),克隆入慢病毒表達(dá)載體,與包裝質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞,包裝出重組假病毒顆粒,感染HEK293細(xì)胞,采用免疫熒光法檢測和鑒定構(gòu)建的重組假病毒。結(jié)果基因序列測定顯示,突變體上5個N-糖基化位點均由天冬酰胺(Asn)的編碼基因(AAT)突變?yōu)楣劝滨０?Gln)的編碼基因(CAG);制備的重組假病毒滴度為4.0×107 TU/ml;免疫熒光檢測顯示構(gòu)建的重組假病毒可正確表達(dá)HTNV的Gn和Gc蛋白。結(jié)論成功構(gòu)建了含有HTNV包膜糖蛋白5個N-糖基化位點全突變的重組假病毒顆粒,為研究糖基化對HTNV包膜糖蛋白生物學(xué)功能的影響創(chuàng)造了條件。
【作者單位】： 第四軍醫(yī)大學(xué)學(xué)員旅;第四軍醫(yī)大學(xué)基礎(chǔ)部微生物學(xué)教研室;
【關(guān)鍵詞】： 漢灘病毒 包膜糖蛋白 糖基化位點全突變體 重組假病毒
【基金】：國家重大傳染病防治專項課題(No.2013ZX10004609-002) 國家自然科學(xué)基金面上項目(No.30801037)
【分類號】：R373
【正文快照】： ***漢坦病毒屬于布尼亞病毒科(Bunyaviridae)的漢坦病毒屬(Hantavirus,HV)。根據(jù)血清學(xué)和基因組信息,該屬病毒目前可分為近40種血清型/基因型,我國流行的主要是I型漢灘病毒(Hantaan virus,HTNV)和Ⅱ型漢城型病毒(Seoul virus,SEOV)[1-2]。漢坦病毒可以引起兩種嚴(yán)重危害人類生

【相似文獻(xiàn)】

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本文編號：541091