本文關(guān)鍵詞：致病性大腸埃希菌EspA抗血清制備及其對(duì)細(xì)菌粘附的影響

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【摘要】：目的制備致病性大腸埃希菌(EPEC)分泌蛋白A(EspA)抗血清,并檢測(cè)其對(duì)EPEC粘附的中和作用。方法以EPEC標(biāo)準(zhǔn)株E2348/69為模板,采用PCR方法獲得EspA基因,將目的基因連接載體pET32a,構(gòu)建重組表達(dá)質(zhì)粒pET32a-EspA,轉(zhuǎn)入表達(dá)菌株BL21后用IPTG誘導(dǎo)表達(dá)并采用Ni-柱親和層析法純化EspA;以純化EspA輔以佐劑免疫家兔,多次免疫獲得抗血清,采用中和試驗(yàn)檢測(cè)抗血清中和EPEC粘附Hep-2細(xì)胞的能力。結(jié)果成功構(gòu)建EspA原核表達(dá)質(zhì)粒,表達(dá)蛋白分子質(zhì)量單位為37ku,與預(yù)期值相符。用純化的表達(dá)蛋白EspA免疫家兔,對(duì)流免疫電泳檢測(cè)抗血清的效價(jià)為1∶2,但稀釋度≤1∶16時(shí)仍能效抑制EPEC粘附Hep-2細(xì)胞。結(jié)論 EspA抗血清具有抑制EPEC粘附Hep-2細(xì)胞作用,有望為疫苗研發(fā)的候選抗原。
【作者單位】： 川北醫(yī)學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院病原生物學(xué)與免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)中心;川北醫(yī)學(xué)院分子生物學(xué)與免疫學(xué)研究所;
【關(guān)鍵詞】： 致病性大腸埃希菌 EspA 抗血清 粘附
【基金】：四川省科技廳項(xiàng)目(No.2009SZ0259,2009SZ0260)
【分類號(hào)】：R378.21
【正文快照】： *?**?致病性大腸埃希菌(Enteropathogenic Escher-chia coli EPEC)是引起發(fā)展中國(guó)家嬰幼兒腹瀉的主要病原菌[1]。EPEC感染宿主后,產(chǎn)生特征損傷即粘附、脫落損傷(attaching and effacing lesion,A/E損傷),主要表現(xiàn)為細(xì)菌的緊密粘附和腸粘膜上皮細(xì)胞微絨毛的脫落[2-3]。A/E損傷

【相似文獻(xiàn)】

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1 黃衍強(qiáng);;大腸桿菌變種EspA的研究進(jìn)展[J];右江民族醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2007年06期

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本文編號(hào)：522918