本文關(guān)鍵詞：幽門螺桿菌臨床株分離及東亞與西方型菌株比較分析，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:分離鑒定幽門螺桿菌(Helicobacter pylori,H.pylori)臨床株,分析其細胞毒素相關(guān)基因A蛋白(Cytotoxinassociated gene A protein,CagA)磷酸化基序EPIYA的結(jié)構(gòu)特點,比較H.pylori東亞株和西方株CagA蛋白的結(jié)構(gòu)差異,初步探討東亞型和西方型CagA對細胞增殖與凋亡的影響。方法:選取胃相關(guān)疾病患者的胃黏膜組織,剪碎后接種于哥倫比亞血瓊脂平板,微需氧培養(yǎng),菌落生長后通過尿素酶試驗、革蘭染色及顯微鏡檢查對H.pylori進行初步鑒定。提取菌落基因組,PCR擴增H.pylori 16S rRNA基因并進行測序鑒定;擴增cagA基因全長序列,連接入pMD18-T載體,將重組載體轉(zhuǎn)入感受態(tài)大腸桿菌(E.coli)DH5α,挑起陽性克隆,測序鑒定;利用DNAStarV7.1和MEGA 6軟件對cagA序列進行比對及聚類分析。應(yīng)用多個生物數(shù)據(jù)庫和多種生物學(xué)軟件對H.pylori CagA蛋白進行信息學(xué)分析;將東亞、西方型全長cagA基因定向克隆入pcDNA3.1真核表達載體,獲得的陽性克隆測序鑒定后轉(zhuǎn)染胃癌細胞株MKN-45,通過流式細胞術(shù)檢測CagA對細胞增殖和凋亡的影響。結(jié)果:成功分離H.pylori臨床株共26株;構(gòu)建pMD18-T/cagA克隆載體后對26株H.pylori的cagA基因全長測序,序列比對分析顯示有6株為西方型,20株為東亞型。東亞型CagA第815~834位點存在13個氨基酸的缺失、部分缺失或變異,西方型中有3株丟失磷酸化位點EPIYA-C;聚類分析顯示H.pylori分離株分別聚類為東亞群、西方型東亞群以及西方群3群,與東亞國家日本菌株的同源性最高,共同聚類于東亞群。選取CagA/GZ7(典型東亞株)和CagA/26695(典型西方株)進行理化特性分析和空間構(gòu)像預(yù)測,結(jié)果顯示CagA/26695有1184個氨基酸,分子量為132.36kDa,等電點為8.93;CagA/GZ7有1175個氨基酸,分子量為131.32kDa,等電點為8.30;兩種菌株的CagA蛋白空間結(jié)構(gòu)較為相似,均為親水性的穩(wěn)定蛋白,位于胞質(zhì)內(nèi),但其抗原肽段的位置、二級結(jié)構(gòu)的組成及保守結(jié)構(gòu)域在東亞型和西方型CagA之間存在差異。與對照組pcDNA3.1細胞比較,高表達cagA的細胞:pcagA/26695細胞組和pcagA/GZ7細胞組的凋亡百分率分別為8.29±0.61和9.98±1.07,均高于對照組細胞(5.38±0.61),差異有統(tǒng)計學(xué)意義(均P0.01);雖然pcagA/GZ7細胞組的凋亡率稍高于pcagA/26695細胞組,但差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。細胞周期結(jié)果顯示:pcagA/26695細胞組和pcagA/GZ7細胞組G0-G1期細胞百分率均高于pcDNA3.1細胞組(百分率分別為36.14±3.16,36.56±1.62和30.88±1.03),差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);S期細胞均顯著低于pcDNA3.1細胞組(百分率分別為48.57±2.90,48.01±2.22和54.57±1.52,P0.05),而G2-M期細胞百分率在三組之間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(百分率分別為15.29±0.43,15.42±0.59和14.55±0.88,P0.05),各細胞周期的百分率在pcagA/26695細胞組和pcagA/GZ7細胞組之間也無顯著差異。結(jié)論:H.pylori臨床分離株以東亞株為主,但也存在西方株感染;東亞型和西方型CagA存在結(jié)構(gòu)差異;臨床分離株之間存在聚類關(guān)系,與日本株同源性較高;生物信息學(xué)預(yù)測東、西方型CagA在二級結(jié)構(gòu)和保守結(jié)構(gòu)域存在一定差異;CagA可抑制胃癌細胞的增殖、促進細胞凋亡,但東亞型與西方型CagA之間無顯著差異。
【關(guān)鍵詞】：幽門螺桿菌 Cag A蛋白 EPIYA基序 聚類分析
【學(xué)位授予單位】：貴州醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R378
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• 英文摘要6-10
• 英文縮略詞表10-11
• 引言11-13
• 材料與方法13-27
• 結(jié)果27-38
• 討論38-42
• 結(jié)論42-43
• 參考文獻43-46
• 綜述46-65
• 參考文獻55-65
• 作者簡歷65-66
• 致謝66-67
• 學(xué)位論文數(shù)據(jù)集67

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3 王懋梁;分離自日本兒童的變異鏈球菌臨床株誘發(fā)的實驗齲[J];國外醫(yī)學(xué).口腔醫(yī)學(xué)分冊;1979年03期

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8 吳利先,楊致邦,林珊珊,劉淼;幽門螺桿菌臨床株粘附素HpaA基因的克隆表達及在診斷中的價值[J];中國人獸共患病雜志;2004年04期

9 姚志紅;周衍衡;鄭永唐;;中國HIV-1臨床株分離培養(yǎng)及其生物學(xué)特性的研究進展[J];皮膚病與性病;2010年04期

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3 鄺小佳;譚守勇;吳碧彤;蔡杏珊;張院良;;克拉霉素耐藥的結(jié)核分枝桿菌臨床株23SrRNA檢測[A];耐藥結(jié)核病與肺部感染性疾病診療進展專題研討會資料匯編[C];2013年

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