本文關鍵詞：IL-33蛋白及抗IL-33全人源單鏈抗體的表達、純化及鑒定，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的表達IL-33蛋白及抗IL-33全人源天然單鏈抗體并進行純化及鑒定。方法前期采用噬菌體展示技術從文庫容量為108的全人源天然抗體文庫篩選了抗IL-33全人源單鏈抗體,并將篩選的抗IL-33基因轉(zhuǎn)入表達載體p LY16中。在前期工作的基礎上,進行了以下研究:表達并純化人IL-33蛋白,將構建的IL-33/PET102/D-TOPO質(zhì)粒轉(zhuǎn)化到大腸桿菌BL21中,表達后用Ni-NTA樹脂純化、濃縮再進行SDS-PGE電泳和Western blot驗證。將抗IL-33 sc Fv/p LY16重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化入大腸桿菌DH5αF’中,應用PCR技術挑選陽性克隆并進行驗證,IPTG誘導可溶性表達,Ni-NTA樹脂純化,SDS-PGE電泳和Western blot驗證。結果 IL-33/PET102/D-TOPO質(zhì)粒測序結果顯示,插入的外源基因為人全長IL-33 c DNA。表達的IL-33融合蛋白相對分子質(zhì)量為45 000左右。Western blot結果顯示表達的蛋白為人IL-33蛋白。對從天然抗體文庫中篩選的抗IL-33單鏈抗體進行測序,結果顯示序列大小為750 bp左右,為開放閱讀框,各序列之間有個別氨基酸的差異,說明為不同的單鏈抗體。ELISA結果顯示抗IL-33單鏈抗體與IL-33有一定的結合能力。Western blot結果證實,表達的抗體為抗IL-33抗體。結論成功表達并純化了IL-33抗原、抗IL-33全人源天然單鏈抗體。
【作者單位】： 西南醫(yī)科大學基礎醫(yī)學院免疫學教研室;西南醫(yī)科大學附屬口腔醫(yī)院第二門診;
【關鍵詞】： IL- 全人源單鏈抗體 表達
【基金】：四川省科技廳項目(2015JY0218,LY-96) 四川省教育廳創(chuàng)新團隊項目(16TD0022)
【分類號】：R392
【正文快照】： 白細胞介素33(interleukin-33,IL-33)是一種前炎癥細胞因子,是IL-1家族,也是可調(diào)控基因轉(zhuǎn)錄的核因子。它作為ST2受體的特異性配體,通過結合由ST2和IL-1受體輔助蛋白組成的二聚體,促進Th2型免疫應答的發(fā)生。IL-33除主要作用于Th2細胞以外,也可作用于樹突狀細胞、肥大細胞、巨噬

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本文編號：494002