本文關鍵詞：N末端Strep蛋白標簽表達載體的構建和應用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的構建攜帶N末端Strep(NS)蛋白標簽的表達載體;在表達載體中構建衣原體RNA聚合酶亞基重組蛋白并表達。方法采用PCR的方法,通過引物引入NS蛋白標簽和新的多克隆位點替代p ET21c-DH質粒中原有的T7蛋白標簽和多克隆位點,選擇新引入的Not I酶切位點進行PCR產物的環(huán)化自連,轉化DH-5α細菌后篩選陽性菌株,PCR法和基因測序法鑒定新構建的表達載體;在新構建表達載體的Bam H I和Sal I位點之間分別插入衣原體RNA聚合酶核心酶的α、β、β'亞基,獲得表達NS-α、NS-β、NS-β'融合蛋白的表達載體,轉化表達菌株Arctic Express,篩選陽性表達菌株,并用考馬斯亮藍染色、Western blot等法鑒定融合蛋白的表達情況。結果成功構建了攜帶NS蛋白標簽的p ET21c-NSMCS載體,并成功將其應用于衣原體RNA聚合酶核心酶亞基融合蛋白的構建及表達。結論獲得穩(wěn)定表達NS-α、NS-β、NS-β'融合蛋白的表達載體,為研究衣原體基因轉錄調控奠定了良好的基礎。
【作者單位】： 南通大學附屬第三人民醫(yī)院臨床藥學室;南通大學藥學院;
【關鍵詞】： Strep蛋白標簽 表達載體 融合蛋白 克隆 RNA聚合酶 衣原體
【基金】：國家自然科學基金資助項目(No 31370209;31400165) 南通大學研究生科研創(chuàng)新計劃項目(No 13025166) “青藍工程”資助項目
【分類號】：R3416
【正文快照】： 蛋白標簽是指利用DNA體外重組技術與目標蛋白基因融合表達的一種多肽或蛋白,常用于目標蛋白的構建、表達、檢測、示蹤及純化[1]。在重組蛋白研究過程中,通常使用親和性標簽(如His、GST、Strep)等。主要因這些親和標簽能使重組蛋白的純化、檢測、固定等變得更方便易行。同時,蛋

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2 李秋珍;由Strep. rishiriensis NK-122產生的一種新的金屬-蛋白酶抑制劑(FMPI)[J];國外醫(yī)學.藥學分冊;1983年04期

3 梁漱芳;;微生物產生的抗膽固醇物質的篩選方法及Strep.violascens產生一種新的膽固醇氧化酶[J];國外醫(yī)學參考資料.藥學分冊;1974年06期

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  本文關鍵詞：N末端Strep蛋白標簽表達載體的構建和應用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號：482905