本文關(guān)鍵詞：N末端Strep蛋白標(biāo)簽表達(dá)載體的構(gòu)建和應(yīng)用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的構(gòu)建攜帶N末端Strep(NS)蛋白標(biāo)簽的表達(dá)載體;在表達(dá)載體中構(gòu)建衣原體RNA聚合酶亞基重組蛋白并表達(dá)。方法采用PCR的方法,通過引物引入NS蛋白標(biāo)簽和新的多克隆位點(diǎn)替代p ET21c-DH質(zhì)粒中原有的T7蛋白標(biāo)簽和多克隆位點(diǎn),選擇新引入的Not I酶切位點(diǎn)進(jìn)行PCR產(chǎn)物的環(huán)化自連,轉(zhuǎn)化DH-5α細(xì)菌后篩選陽性菌株,PCR法和基因測序法鑒定新構(gòu)建的表達(dá)載體;在新構(gòu)建表達(dá)載體的Bam H I和Sal I位點(diǎn)之間分別插入衣原體RNA聚合酶核心酶的α、β、β'亞基,獲得表達(dá)NS-α、NS-β、NS-β'融合蛋白的表達(dá)載體,轉(zhuǎn)化表達(dá)菌株Arctic Express,篩選陽性表達(dá)菌株,并用考馬斯亮藍(lán)染色、Western blot等法鑒定融合蛋白的表達(dá)情況。結(jié)果成功構(gòu)建了攜帶NS蛋白標(biāo)簽的p ET21c-NSMCS載體,并成功將其應(yīng)用于衣原體RNA聚合酶核心酶亞基融合蛋白的構(gòu)建及表達(dá)。結(jié)論獲得穩(wěn)定表達(dá)NS-α、NS-β、NS-β'融合蛋白的表達(dá)載體,為研究衣原體基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控奠定了良好的基礎(chǔ)。
【作者單位】： 南通大學(xué)附屬第三人民醫(yī)院臨床藥學(xué)室;南通大學(xué)藥學(xué)院;
【關(guān)鍵詞】： Strep蛋白標(biāo)簽 表達(dá)載體 融合蛋白 克隆 RNA聚合酶 衣原體
【基金】：國家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(No 31370209;31400165) 南通大學(xué)研究生科研創(chuàng)新計(jì)劃項(xiàng)目(No 13025166) “青藍(lán)工程”資助項(xiàng)目
【分類號(hào)】：R3416
【正文快照】： 蛋白標(biāo)簽是指利用DNA體外重組技術(shù)與目標(biāo)蛋白基因融合表達(dá)的一種多肽或蛋白,常用于目標(biāo)蛋白的構(gòu)建、表達(dá)、檢測、示蹤及純化[1]。在重組蛋白研究過程中,通常使用親和性標(biāo)簽(如His、GST、Strep)等。主要因這些親和標(biāo)簽?zāi)苁怪亟M蛋白的純化、檢測、固定等變得更方便易行。同時(shí),蛋

【相似文獻(xiàn)】

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1 陸庭嫣;唐振華;吳禮堂;;RapID STR系統(tǒng)和API 20 Strep系統(tǒng)臨床鏈球菌鑒定結(jié)果的比較[J];江西醫(yī)學(xué)檢驗(yàn);2006年06期

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3 梁漱芳;;微生物產(chǎn)生的抗膽固醇物質(zhì)的篩選方法及Strep.violascens產(chǎn)生一種新的膽固醇氧化酶[J];國外醫(yī)學(xué)參考資料.藥學(xué)分冊;1974年06期

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中國重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 陸庭嫣;唐振華;吳禮堂;;RapID STR系統(tǒng)和API 20 Strep系統(tǒng)臨床鏈球菌鑒定性能的比較[A];第6次全國微生物學(xué)與免疫學(xué)大會(huì)論文摘要匯編[C];2004年

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本文編號(hào)：482905